[发明专利]用于检测结直肠癌的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了用于检测结直肠癌的试剂盒，包括寡核苷酸预混液I组中核苷酸序列，所述核苷酸序列包括SEQ ID NO.01、SEQ ID NO.02、SEQ ID NO.03、SEQ ID NO.04、SEQ ID NO.05、SEQ ID NO.06、SEQ ID NO.07、SEQ ID NO.08、SEQ ID NO.09、SEQ ID NO.10。本发明可实现结直肠癌的诊断，具有灵敏度高、特异性好、检测时间短、普及度高、检测结果稳定的优势。

技术领域

本发明属于肿瘤学生物检测领域，尤其涉及用于检测结直肠癌的试剂盒及其应用。

背景技术

结直肠癌(CRC)是当今最常见的疾病之一，每年全球有约120万名患者被确诊为结直肠癌，而有超过60万名患者直接或间接死于结直肠癌。结直肠癌的发病率会随着年龄的增大而增加，比如发达国家的结直肠癌发病中位年龄为70岁。我国结直肠癌发病率及死亡率呈总体增高趋势，结直肠癌在10年间的发病率表现为明显升高趋势，而在死亡率方面，男性患者同样表现为逐年上升趋势，而女性患者则相对趋于平稳。2015年我国约有281.4万人死于癌症，结直肠癌在男性和女性中死亡率为第五位。

I期大肠癌的5年生存率超过90％，二期的80％左右，三期的也有60％左右，但如果到了第IV期，5年生存率只有10％。而大肠癌的复发几率与确诊时的分期具相关性，一般，越是早期发现的大肠癌，治疗后复发率就会越低。在生存期方面，I期患者的5年生存率可达90％以上，而IV期患者只有略大于10％的5年生存率。

肿瘤复发和转移是结直肠癌患者的主要死亡原因，目前临床暂无明显有效的治疗措施，预防结直肠癌治疗后的复发或转移，治疗后规范的辅助化疗和放疗可以减少大肠癌的复发转移或延长复发转移的时间，但并不能完全避免肿瘤的复发甚至转移，因此一般临床医生会建议病人定期检查。同时结直肠癌CRC有着较高的复发率，实施根治术后，有50％的复发可能，结直肠癌治疗后两年内复发率最高，因此临床大夫建议患者每3-6个月复查一次，两年后改为半年一次一直持续到第3年。

目前结直肠癌发生或复发检测的方法及其相关特点包括如下所述：(1)便隐血试验(Fecal Occult Blood Test，FOBT)：具有方便、无创、患者接受度高等优点，但其检验结果的假阳性率及假阴性率均较高，易造成漏检或错检；(2)全结肠镜/乙状结肠镜检查：是目前诊断/复发检测的金标准检查方法，其检验结果的敏感性和特异性均较高，但部分患者检查过程需要麻醉或镇静，且检查中可能出现出血、穿孔等并发症(0.1％)，这些检查过程的不适以及检查的禁忌症使得很多患者对接受结肠镜检查心有疑虑，并且作为大规模结直肠癌早期筛查方法来讲，耗费的社会医疗资源将过于巨大；(3)CEA、CA99等血清常规肿瘤标志物：现今被广泛使用与肿瘤辅助诊断、复发监控，检测灵敏度较低；(4)PET-CT检查:对于病情复杂、常规检查无法明确诊断的患者可作为有效的辅助检查。术前检查提示为Ⅲ期以上肿瘤，为了解有无远处转移使用；(5)经直肠腔内超声检查、B型超声、CT、MRI：为常规检测，具有方便快捷的优越性；明确病变侵犯肠壁的深度，向壁外蔓延的范围和远处转移的部位。

现有研究发现癌细胞在破裂和死亡时，会释放出循环肿瘤DNA(circulatingtumor DNA，ctDNA)。游离循环肿瘤DNA是一种胞外DNA，主要存在于血液(血清或血浆)、滑膜液和脑脊液等体液中。ctDNA释放入血的机制目前仍无定论，现在普遍认为细胞的凋亡和坏死为血液内ctDNA的主要来源。近年来，大量ctDNA检测在肿瘤诊断、治疗中的研究被报道。

Epigenomics AG公司的Septin9基因甲基化检测试剂盒EpiproColon 2.0为结直肠癌辅助诊断提供了一个良好的检测手段，但是存在检测血量太大，检测灵敏度较低的问题。

综上所述，仍有必要提供一种的待测样本血量少、灵敏度高的基因甲基化检测试剂盒。

发明内容