[发明专利]一种西兰花蛋白来源的ACE抑制肽、ACE抑制肽酶切代谢产物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种西兰花蛋白来源的ACE抑制肽酶切代谢产物，其特征在于：所述的ACE抑制肽酶切代谢产物为ACE抑制肽经胃蛋白酶和胰蛋白酶消化酶解所得，其氨基酸序列为Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu，Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu，Leu-Ala-Lys和Ala-Lys，所述的ACE抑制肽氨基酸序列为Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu-Ala-Lys。

2.一种权利要求1所述的西兰花蛋白来源的ACE抑制肽酶切代谢产物的制备方法，其特征在于步骤如下：

（1）以西兰花新鲜茎叶为原料进行压榨，将所得汁液加热到85-95℃，保温8-12min，沉淀物经离心，干燥，即得西兰花蛋白粗提物；

（2）西兰花茎叶中多肽提取物的酶法制备

以西兰花蛋白粗提物为原料，按料液质量比1：15-25加入蒸馏水，在温度55-65℃、pH8.0条件下，加入西兰花蛋白粗提物质量1.5-2.5%的Aclase碱性蛋白酶，酶解3h后，灭酶，冷却，并经离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽提取物；

（3）西兰花多肽提取物超滤和凝胶过滤

将西兰花多肽提取物采用Valflow 50超滤，然后用G-15凝胶柱分离，洗脱条件为：洗脱液为去离子水，流速13-17mL/h，上样量90-110mg，收集三个西兰花小肽分离组分，经过滤，干燥测定ACE抑制活性；

（4）西兰花多肽提取物的高效液相色谱分离纯化

将凝胶过滤后得到的ACE抑制活性最强的组分，进一步进行液相分离，色谱条件：色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S-5，柱温30℃，流动相A：水+0.2%甲酸，流动相B：乙腈，洗脱方式：梯度洗脱，0-30min流动相A:100%-92.5%，流动相B：0-7.5%；30-33min流动相A：92.5%-15%，流动相B：7.5%-85%；33-43min流动相A：15%，流动相B：85%；43-45min流动相A：15%-100%，流动相B 85%-0%；45-55min流动相A：100%，流动相B 0%，流速1.0 ml/min，检测波长：280nm，进样体积100uL，收集四个西兰花小肽分离组分，干燥测定ACE抑制活性；

（5）ACE抑制肽的结构鉴定

采用质谱对液相分离得到的ACE抑制活性最强的峰进行分析，鉴定ACE抑制肽的结构，获得其氨基酸序列为Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu-Ala-Lys；

（6）ACE抑制肽胃肠道酶切代谢后肽段鉴定

将步骤（5）得到的ACE抑制肽依次用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶切消化得到ACE抑制肽酶切代谢产物，鉴定ACE抑制肽酶切代谢产物获得其氨基酸序列为Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu，Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu，Leu-Ala-Lys和Ala-Lys。

3.根据权利要求2所述的西兰花蛋白来源的ACE抑制肽酶切代谢产物的制备方法，其特征在于：步骤（6）中所述的胃蛋白酶与所述的ACE抑制肽的质量为 1∶100，所述的胰蛋白酶与所述的ACE抑制肽的质量比为1∶50。

4.根据权利要求1所述的西兰花蛋白来源的ACE抑制肽酶切代谢产物在制备辅助降血压食品或降压药品方面的应用。