[发明专利]一种用于检测慢病毒RCL的引物、探针及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测慢病毒RCL的引物对，其特征在于，所述引物对包括正向引物和反向引物，其中，所述正向引物的序列包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述反向引物的序列包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

2.一种用于检测慢病毒RCL的探针，其特征在于，所述探针序列为如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

3.一种用于检测慢病毒RCL的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对和权利要求2所述的探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性质粒、PCR反应体系和酶体系。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述标准阳性质粒的制备方法包括以下步骤：

步骤i，获取慢病毒RCL的靶序列片段；

步骤ii，构建包含上述靶序列片段的重组质粒；

步骤iii，测定重组质粒的浓度，并计算相应拷贝数，得到标准阳性质粒。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系包括缓冲液(Buffer)、MgCl2、dNTPs；所述酶体系包括反转录酶和热启动DNA聚合酶。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤i包括以下子步骤：

步骤i-a，获取慢病毒RCL的cDNA；

步骤i-b，以上述获取的cDNA为模板，扩增得到慢病毒RCL的靶序列片段。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤ii包括以下子步骤：

步骤ii-a，将得到的靶序列片段与载体进行连接；

步骤ii-b，将连接好的载体转化至感受态细胞中进行表达，然后加入液体培养基进行培养，得到菌液；

步骤ii-c，将上述菌液涂布至平板培养基上培养，待形成单菌落后，挑选单菌落进行检测；

步骤ii-d，根据检测结果，选取菌落进行扩大培养，然后抽提质粒。

9.一种检测慢病毒RCL的方法，优选采用权利要求3至8之一所述的试剂盒进行，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1，对待测样本进行处理；

步骤2，对处理后的待测样本进行检测。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述检测优选采用荧光定量PCR方法进行，所述反应程序为：95℃下预变性30s；然后95℃变性5s，60℃退火和延伸共30s，进行40个循环，4℃保存。