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[发明专利]慢病毒生产用的无血清悬浮液系统-CN201780065613.5在审
发明人：于昕;X·德莫尔拉特杜杰 -专利权人：生命技术公司
申请日： 2017-09-29 - 公布日： 2019-06-14 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：一种慢病毒载体生产系统，其包括(a)控制细胞生长的慢病毒培养补充物，(b)提高转染效率的转染试剂，其包括DHDMS、DOPE和胆固醇，(c)促进慢病毒生产的慢病毒生产增强剂，其包括丙酸钠、丁酸钠和咖啡因，其中所述慢病毒载体生产系统是无血清的。一种慢病毒载体生产方法，其包括使用所述慢病毒生产系统。慢病毒载体生产用的另一种方法包括(a)在无血清培养基中培养真核细胞，(b)提供控制细胞生长的慢病毒培养补充物，(c)使用提高转染效率的包括DHDMS、DOPE和胆固醇的转染试剂用慢病毒载体转染所述细胞，以及(d)使用能够促进慢病毒生产的包括丙酸钠、丁酸钠的慢病毒生产增强剂提供慢病毒生产。
慢病毒慢病毒载体生产系统生产细胞生长转染试剂转染效率丙酸钠补充物胆固醇丁酸钠无血清增强剂咖啡因无血清培养基真核细胞悬浮液转染细胞

[发明专利]一种慢病毒载体全封闭生产的方法及系统-CN201911077578.6在审
发明人：姚树元;刘丹;于开鹏;徐燕;曹鹏亮;张会;陈星星;杨吕杰 -专利权人：无锡生基医药科技有限公司
申请日： 2019-11-06 - 公布日： 2020-01-21 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种慢病毒载体全封闭生产的方法及系统，方法包括步骤1：慢病毒载体宿主细胞的培养增殖；步骤2：慢病毒载体宿主细胞的包装，将含有慢病毒载体基因组序列的质粒通过转染试剂转染入慢病毒载体宿主细胞，制得慢病毒载体培养细胞上清液并收集；步骤3：慢病毒载体上清液的纯化，将慢病毒载体上清液依次进行澄清、酶切消化、超滤、层析柱纯化后制得慢病毒载体。系统包括宿主细胞增殖培养装置、慢病毒载体包装装置、慢病毒载体纯化装置，各装置使用一次性无菌耗材，有效避免交叉污染，实现多种产品的共线生产。
慢病毒载体宿主细胞上清液增殖培养装置层析柱纯化基因组序列全封闭生产一次性无菌包装装置纯化装置共线生产交叉污染培养细胞培养增殖转染试剂装置使用超滤耗材酶切质粒转染澄清消化

[发明专利]具有启动子和增强子组合的载体用于治疗苯丙酮尿症-CN201880077904.0在审
发明人： T·拉胡森;C·D·保扎 -专利权人：美国基因技术国际有限公司
申请日： 2018-10-02 - 公布日： 2020-07-17 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：公开了用于表达慢病毒颗粒的慢病毒载体系统。该慢病毒载体系统包括治疗载体。该慢病毒载体系统产生慢病毒颗粒，用于上调患有苯丙酮尿症(PKU)的对象细胞中PAH表达。
具有启动子增强组合载体用于治疗丙酮

[发明专利]一种重组慢病毒载体、重组慢病毒及含有该重组慢病毒的干细胞-CN201110029476.4无效
发明人：邹仲敏;钟波;叶枫;庞学利;粟永萍 -专利权人：中国人民解放军第三军医大学
申请日： 2011-01-27 - 公布日： 2011-08-17 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明“一种重组慢病毒载体、重组慢病毒及含有该重组慢病毒的干细胞”，属于医学分子生物学领域。本发明的一种重组慢病毒载体，其特征在于：在慢病毒载体的多克隆位点顺序插入Survivin启动子、Apoptin基因和SV40Poly A序列，所述慢病毒载体为FG-12。本发明重组慢病毒的应用，如转染用于移植的干细胞，将使移植到患者体内的干细胞置于本发明重组慢病毒载体的启动子的监控之下，移植的干细胞一旦发生恶性转化，将立即启动重组慢病毒中自杀基因Apoptin的表达，使恶性转化的细胞凋亡而死在临床使用中，本发明的重组慢病毒对转化干细胞起着即特异地起到预警、反应、示踪、清除的功能。
一种重组病毒载体含有干细胞

[发明专利]一种常规离心制备高滴度慢病毒载体的方法-CN201910485293.X在审
发明人：王恩秀;张海;汪晨 -专利权人：南京艾德免疫治疗研究院有限公司
申请日： 2019-06-05 - 公布日： 2020-12-08 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了一种常规离心制备高滴度慢病毒载体的方法，包括如下步骤：将Tris HCl溶液、NaCl溶液、EDTA溶液进行混合，得到慢病毒浓缩液；慢病毒浓缩液溶解蔗糖，得到慢病毒提取液；将慢病毒提取液与慢病毒上清液的混合液放入离心机中，在离心力10000g～25000g，4℃离心10h；离心后弃上清，加入慢病毒溶解液，即为高滴度慢病毒载体；该方法操作简单、不需要超高速离心机，使用常规离心机即可制备高滴度慢病毒载体，制备成本低，可以广泛用于大部分实验室
一种常规离心制备高滴度慢病毒载体方法

[发明专利]一种重组PCGUR慢病毒干扰载体、慢病毒、构建方法及应用-CN201610065907.5在审
发明人：王煜 -专利权人：内蒙古医科大学附属医院
申请日： 2016-01-25 - 公布日： 2016-06-08 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组PCGUR慢病毒干扰载体，该重组PCGUR慢病毒干扰载体，由慢病毒干扰载体PCGUR用内切酶AgeI和内切酶EcoRI双酶切后，连入带AgeI和EcoRI粘性末端的mmu-miR-199b-5p基因特异片段重组而得，本发明还公开了该重组PCGUR慢病毒干扰载体的慢病毒及其构建方法。本发明提供的重组PCGUR慢病毒干扰载体，具有转染效率高、慢病毒滴度高的优点。
一种重组 pcgur 病毒干扰载体构建方法应用

[发明专利]优化的苯丙氨酸羟化酶表达-CN202080040373.5在审
发明人： T·拉胡森;肖玲芝;C·D·保扎 -专利权人：美国基因技术国际有限公司
申请日： 2020-06-01 - 公布日： 2022-01-07 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：公开了用于表达慢病毒颗粒的慢病毒载体系统。该慢病毒载体系统包括治疗载体。该慢病毒载体系统产生编码密码子优化的PAH的慢病毒颗粒，用于上调患有苯丙酮尿症(PKU)的对象的细胞中PAH的表达。
优化苯丙氨酸羟化酶表达

[发明专利]BANCR基因过表达慢病毒载体、BANCR慢病毒及构建方法和应用-CN201710218856.X在审
发明人：朱月春;杨丽娟;白宏刚;蒋露;杨雨叶;杨慧鑫;易子寒;张巧 -专利权人：昆明医科大学
申请日： 2017-04-05 - 公布日： 2017-06-09 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了一种BANCR基因过表达慢病毒载体、BANCR慢病毒及构建方法和应用，涉及分子生物学的技术领域。本发明提供的BANCR基因过表达慢病毒载体，以表达绿色荧光蛋白的LV5慢病毒过表达载体为基础进行构建，并整合有BANCR基因，解决了BANCR基因研究中所需要的过表达载体的技术问题，使BANCR基因研究更直观；本发明提供的BANCR基因过表达慢病毒载体的构建方法，流程简单，阳性率高；本发明提供的BANCR慢病毒具备良好的生物安全性；此外，本发明还提供了BANCR慢病毒的构建方法及BANCR基因过表达慢病毒载体和/或BANCR慢病毒在制备BANCR基因过表达细胞中的应用。
bancr 基因表达病毒载体构建方法应用

[发明专利]一种慢病毒载体纯化方法-CN202310800890.3在审
发明人：赵云灿;罗易坤;曹元元;高海 -专利权人：上海药明巨诺生物医药研发有限公司;上海药明巨诺生物科技有限公司
申请日： 2020-09-15 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及病毒载体纯化技术领域，提供一种慢病毒载体纯化方法：包括以下步骤，1)，将慢病毒收获液进行过滤和核酸酶孵育，得到慢病毒载体澄清收获液；2)，对所述慢病毒载体澄清收获液采用阴离子交换层析和/或复合模式层析处理，获得纯化的慢病毒载体样品。本发明提供的一种慢病毒载体纯化方法，慢病毒载体收获率高，细胞宿主蛋白、宿主DNA、残余质粒等杂质残留低，安全性好，适合大规模生产制备，并且满足临床上细胞治疗和基因治疗的使用要求。
一种病毒载体纯化方法

[发明专利]一种慢病毒载体纯化方法-CN202010967219.4有效
发明人：赵云灿;罗易坤;曹元元;高海 -专利权人：上海药明巨诺生物医药研发有限公司;上海药明巨诺生物科技有限公司
申请日： 2020-09-15 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及病毒载体纯化技术领域，提供一种慢病毒载体纯化方法：包括以下步骤，1)，将慢病毒收获液进行过滤和核酸酶孵育，得到慢病毒载体澄清收获液；2)，对所述慢病毒载体澄清收获液采用阴离子交换层析和/或复合模式层析处理，获得纯化的慢病毒载体样品。本发明提供的一种慢病毒载体纯化方法，慢病毒载体收获率高，细胞宿主蛋白、宿主DNA、残余质粒等杂质残留低，安全性好，适合大规模生产制备，并且满足临床上细胞治疗和基因治疗的使用要求。
一种病毒载体纯化方法

[发明专利]一种Gα基因过表达慢病毒载体、慢病毒及其构建方法-CN201610627755.3在审
发明人：夭建华;朱洲海;李雪梅;缪明明;米其利;管莹;高茜;唐萍 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-03 - 公布日： 2016-12-07 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种Gα基因过表达慢病毒载体、Gα慢病毒及其构建方法，属于分子生物学技术领域。本发明通过基因重组技术，以pLVX‑IRES‑mCherry慢病毒表达载体为基础进行构建，并整合有Gα基因，得到Gα基因过表达慢病毒载体pLVX‑IRES‑mCherry‑Gα。使用慢病毒包装质粒pRSV‑Rev、pMDLg‑pRRE和pMD2.G对Gα基因过表达慢病毒载体pLVX‑IRES‑mCherry‑Gα进行包装，通过转染HEK293细胞，得到Gα慢病毒。本发明所构建的Gα基因过表达慢病毒载体对宿主细胞的转染效率高，能特异、持续、高效地促进Gα基因在宿主细胞中的稳定表达。
一种基因表达病毒载体及其构建方法

[发明专利]慢病毒载体、构建方法及其应用-CN202011173490.7有效
发明人：杨佳丽;杨兴林;马佩敏;贾国栋;由庆睿 -专利权人：和元生物技术（上海）股份有限公司
申请日： 2020-10-28 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明属于生物领域，尤其涉及慢病毒载体、构建方法及其应用。本发明公开了一种慢病毒载体的制备方法，包括：以基于LTR1.27‑GEW质粒为骨架，在5’端添加R和U5区，同时删除3’端的PBS序列，得到慢病毒载体Obio‑01,将慢病毒载体Obio‑01中的5’CMV启动子更换为人免疫缺陷病毒‑1的U3启动子，得到慢病毒载体Obio‑03；将将慢病毒载体Obio‑01中的5’CMV启动子更换为人免疫缺陷病毒‑2的U3启动子，得到慢病毒载体Obio‑04。本发明制备得到的新型的第四代慢病毒载体在保障安全性的前提下，还能够具有高产量的病毒滴度，可应用于基因治疗等领域。
病毒载体构建方法及其应用

[发明专利]体外慢病毒介导BMP-2基因诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的方法-CN201310065020.2无效
发明人：符培亮;张雷;丁喆如;吴海山;吴宇黎;丛锐军;陈松 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2013-02-28 - 公布日： 2013-06-12 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明一种体外慢病毒介导BMP-2基因诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的方法，包括一个将滑膜间充质干细胞分离和培养的步骤，一个构建重组质粒pFUGW-oBMP-2的步骤，一个制备转染慢病毒病毒液的步骤，一个利用转染慢病毒病毒液转染滑膜间充质干细胞的步骤，在制备转染慢病毒病毒液的步骤中，利用重组质粒pFUGW-oBMP-2和包装质粒共同构成转染慢病毒，在利用转染慢病毒病毒液转染滑膜间充质干细胞的步骤中，取第三代以上的滑膜间充质干细胞，和转染慢病毒的病毒液混合，然后加入不完全成软骨细胞诱导培养液中诱导后得到软骨细胞。本发明证明经转染慢病毒转染的SMSCs足够安全，在体外可自发向软骨分化。
体外病毒 bmp 基因诱导滑膜间充质干细胞软骨细胞分化方法

[发明专利]一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法-CN201410718290.3有效
发明人：蒋伟;阳小飞;李小红 -专利权人：中南民族大学
申请日： 2015-08-03 - 公布日： 2015-07-29 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，包括如下步骤：取Tris-HCl溶液、NaCl溶液、EDTA溶液进行混合，得到TNE buffer病毒浓缩液；取蔗糖固体用TNE buffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液；将病毒提取液与慢病毒上清液的混合溶液放入离心机中，在相对离心力1000g～10000g，4℃的条件下离心；去除上清液，随后中加入PBS，得到慢病毒溶液，将慢病毒溶液放入冰箱中4℃条件下静置，上清液即为高滴度慢病毒产品；该方法不需要超高速离心，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒产品，慢病毒产品制备成本低，该方法操作简单，可以广泛用于大部分实验室。
一种常规离心制备高滴度慢病毒产品方法

[发明专利]一种慢病毒的纯化方法-CN202111136995.0在审
发明人：龙炎杏;胡清云;刘彩云;许澎 -专利权人：湖南丰晖生物科技有限公司
申请日： 2021-09-27 - 公布日： 2022-01-28 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种慢病毒的纯化方法，该纯化方法是在纯化的浓缩过程中使用一定浓度的PEG(添加KCl或NaCl)按比例与病毒上清进行混合，离心，得到慢病毒沉淀；用PBS溶解，对获得的慢病毒悬液进行核酸酶Benzonase酶切处理；添加鱼精蛋白进行沉淀慢病毒，添加1mol/L NaCl溶解病毒，离心，得到初纯化的慢病毒悬液；再经过蔗糖密度梯度离心，获得纯化的慢病毒。本发明制得的慢病毒纯化液无外源因子污染，细胞宿主蛋白、宿主DNA残留度低，安全性好，纯度和滴度高，可达到动物实验及临床要求。
一种病毒纯化方法

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