[发明专利]一种用于序列测定的基于固定化肽酶反应器酶解方法

权利要求书

1.一种用于序列测定的基于固定化肽酶反应器酶解方法，其特征在于：包括利用固定化羧肽酶反应器和固定化氨肽酶反应器酶解多肽。

2.按照权利要求1所述的酶解方法，其特征在于：

1)将肽酶固定在石英毛细管柱中；

2)使用固定化羧肽酶和氨肽酶对多肽进行酶解。

3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于：

1)将肽酶固定在石英毛细管柱中，其具体步骤如下：

将羧肽酶溶在pH 3-10的缓冲液中，羧肽酶终浓度为0.001-1mg/mL，得到溶液A，在温度为4℃-10℃时向毛细管柱中通入溶液A，流速为0.01-20μL/min，通入时间为30-720min，再用1-3mL水以流速10μL/min冲洗100min，得到羧肽酶固定化酶反应器；

将氨肽酶溶在pH 3-10的缓冲液中，氨肽酶终浓度为0.001-1mg/mL，得到溶液A，在温度为4℃-10℃时向毛细管柱中通入溶液A，流速为0.01-20μL/min，通入时间为30-720min，再用1-3mL水以流速10μL/min冲洗100min，得到氨肽酶固定化酶反应器；

2)使用固定化酶反应器对多肽进行酶解，其具体步骤如下：

将多肽溶解在pH 3-10的缓冲液中，多肽终浓度为0.001-1mg/mL，得到溶液B，将溶液B在离心并取其上清得到溶液C；

将溶液C先后分别通入羧肽酶固定化酶反应器和氨肽酶固定化酶反应器；

流速为0.01-20μL/min，通入时间为30-720min，反应温度为20-90℃。

4.按照权利要求2或3所述的方法，其特征在于：将溶液C先通入羧肽酶固定化酶反应器、后通入氨肽酶固定化酶反应器；或将溶液C先通入氨肽酶固定化酶反应器、后通入羧肽酶固定化酶反应器。

5.按照权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：羧肽酶包括但不限于羧肽酶Y、羧肽酶A和羧肽酶B中的一种或两种。

6.按照权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述的石英毛细管柱包括但不限于开管柱、整体柱和填充柱中的一种或两种以上。

7.按照权利要求1-6任一所述的方法，其可应用于生物样品中蛋白水解酶水解底物或多肽，水解底物或多肽再酶解后序列的测定，生物样品为细胞、组织、体液中的一种或二种以上；所述多肽为生物样品中蛋白水解酶水解底物或多肽。

8.按照权利要求1-6任一所述的方法,可用于对药物多肽或生物毒液中多肽酶解后的氨基酸序列测定。