[发明专利]一种基于SSR标记法的西瓜杂交种子纯度鉴定方法

说明书

本申请公开一种基于SSR标记法的西瓜杂交种子纯度鉴定方法，方法包括：以杂交西瓜叶片单株的基因组DNA为模板，加入上游引物和下游引物，进行PCR扩增，得到扩增产物；将所述扩增产物进行凝胶电泳，EB染色后，置于凝胶成像系统内成像；根据成像结果统计带型；根据带型结果计算西瓜杂交种子的纯度。由于分子标记技术直接从DNA水平揭示双亲的差异性，因此实验结果准确，可靠，而且可以在苗期甚至种子水平进行鉴定，因此大大缩短了实验周期。与传统方法相比，本申请基于SSR标记法的西瓜杂交种子纯度鉴定方法可以准确鉴定杂交种纯度，不受环境影响；在苗期即可鉴定纯度，显著缩短鉴定周期。

技术领域

本发明涉及生物标记技术领域，特别涉及一种基于SSR标记法的西瓜杂交种子纯度鉴定方法。

背景技术

西瓜原产非洲南部，果实脆嫩，营养丰富，为一年生草本植物，葫芦科，西瓜属。在中国，西瓜已有千余年栽培史。目前，我国是最大的西瓜生产国与消费国，而且，中国西瓜生产已实现100％杂种化。

种子是重要的农业生产资料，种子质量优劣直接影响农业生产效果。种子纯度是衡量种子质量的重要指标，建立可靠、便捷的种子纯度检测方式，对于准确快速评价种子质量，保证种子生产者、销售者和使用者的利益具有重要意义。西瓜是我国重要的特色水果，色、香、味俱全，深受消费者喜爱。目前，西瓜杂交种在我国占据相当市场，该品种的配制依赖于传统的去雄授粉技术，可能出现去雄不彻底的问题，因此，鉴定西瓜杂交种纯度十分必要。传统种子纯度鉴定主要通过种子形态鉴定、田间表型鉴定等，存在准确率低、周期长等问题。

发明内容

本发明实施例提供一种基于SSR标记法的西瓜杂交种子纯度鉴定方法，解决传统通过种子形态鉴定、田间表型鉴定等产生准确率低和周期长的问题。

本申请实施例示出了一种基于SSR标记法的西瓜杂交种子纯度鉴定方法，所述方法包括以下步骤：

以杂交西瓜叶片单株的基因组DNA为模板，加入上游引物和下游引物，进行PCR扩增，得到扩增产物；

将所述扩增产物进行凝胶电泳，EB染色后，置于凝胶成像系统内成像；

根据成像结果统计带型；

根据带型结果计算西瓜杂交种子的纯度。

进一步地，所述上游引物的核苷酸序列为5'-GCAAGTGAAATGAAGCCAAA-3'，所述下游引物的核苷酸序列为5'-ACCAACACAGCCAAAGGAAT-3'。

进一步地，采用改良热碱法提取杂交西瓜叶片单株的基因组DNA，所述改良热碱法包括：

将所述西瓜子叶剪碎置于离心管中，向离心管中加入NaOH，将离心管在沸水中放置预定时间，向离心管中加HCl中和，将离心管放置于Tris-HCl进行沸水浴，得到所述杂交西瓜叶片单株的基因组DNA。

进一步地，在所述以杂交西瓜叶片单株的基因组DNA为模板，加入上游引物和下游引物，进行PCR扩增，得到扩增产物的步骤之前，还包括：

提取西瓜叶片基因组DNA；

以所述西瓜叶片基因组DNA中母本材料和父本材料的基因组DNA为模板，采用SSR分子标记进行PCR扩增，筛选出可以在亲本材料之间呈现出多态性扩增的上游引物和下游引物。

进一步地，所述PCR扩增为多态性扩增。

进一步地，所述PCR扩增中PCR反应体系包括10μL的2×taq mix，0.4μL的所述上游引物，0.4μL的所述下游引物，2μL的所述杂交西瓜叶片单株的基因组DNA，加水至20μL。

进一步地，所述PCR扩增中PCR反应过程包括：