[发明专利]一种表达O型口蹄疫包涵体工程菌的培养基

说明书

本发明公开了属于生物技术领域的一种表达O型口蹄疫包涵体工程菌的培养基。本发明包括基础培养基及补料培养基，不含速效碳源，通过流加60%葡萄糖来缓慢补充碳源，能够降低乙酸的产生，也防止了氨水调节pH导致活菌数下降的发生。本培养基补料培养基通过菌体合成所需氨基酸比例，合理添加不同种类氨基酸，避免了营养过剩的浪费。本培养基能显著提高大肠杆菌工程发酵密度，同时保证高密度下有高的活菌数，不降低每单位菌体蛋白表达量。提高目的蛋白表达总量，提高生产效率，降低生产成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种表达O型口蹄疫包涵体工程菌的 培养基。

背景技术

随着生物制药的发展，利用重组DNA技术克隆大肠杄菌制得的工程菌，生 产生物药物数量越来越多，为生物技术获得生物药物产品的主要途径。

一般情况下，生物药物的产率与大肠杆菌发酵密度密切相关，大肠杆菌的收 率直接关系到生物药物的产率。所以在菌体表达蛋白效率相当的情况下，大肠 杆菌的发酵密度直接影响到生物药物的效率和成本。特别是在同样的纯化技术 条件下，不断有学者进行这方面的研究，如根据化学计量模式(stoichiometric mode1)的方法重新对培养基配方进行设计和优化。在发酵策略方面，为了提高 细菌发酵密度，发酵工艺普遍采用补料－分批发酵(fed－batch)的方式提高 菌体生长密度和目标产物的表达总量。开发出一种适用于工程菌高密度发酵培 养的培养基是非常有必要的。

发明内容

为了解决工程菌的高密度发酵培养问题，本发明提出了一种表达O型口蹄 疫包涵体工程菌的培养基。

一种表达O型口蹄疫包涵体工程菌的培养基，包括基础培养基及补料培养 基；

所述基础培养基每升包含下列配比组分：酵母提取物2～6g/L，胰蛋白胨 1～4g/L，七水硫酸镁0.5～1.5g/L，六水氯化钴0.1～0.3g/L，四水氯化锰0.1～0.2g/L，磷酸二氢钾0.3～0.6g/L，磷酸氢二钾1.2～1.6g/L，泛酸钙0.1～0.4g/L， 生物素0.05～0.15g/L，叶酸0.05～0.15g/L；

所述补料培养基每升包含下列配比组分：酵母提取物30～50g/L，胰蛋白 胨20～30g/L，磷酸二氢钾4～5g/L，磷酸氢二钾13～16g/L，天冬酰胺4～7g/L， 丝氨酸4～7g/L，甘氨酸1.5～2.2g/L,谷氨酸3～4g/L,丙氨酸3～4g/L,精氨酸 1.5～2.1g/L,亮氨酸1.5～2.1g/L,赖氨酸1.1～1.8g/L，L-甲硫氨酸0.5～1.2g/L， L-异亮氨酸0.5～1.2g/L，L-缬氨酸0.5～1.2g/L，组氨酸0.2～0.6g/L。

一种表达O型口蹄疫包涵体的工程菌制的备方法，包括如下步骤：

(1)摇瓶培养：所用培养基为权利要求1所述的基础培养基，用冻存菌种 于摇瓶培养基中，在摇床中37℃，180～220rpm条件下培养6～10h至对数生 长期；

(2)基础培养阶段：取500ml菌液接种到发酵罐的发酵培养基中，温度 控制在37℃；通过流加60％葡萄糖控制pH在7.2；溶氧控制在30％，开始阶 段搅拌速度为40～60rpm，通气量为4～6L/min；当溶氧水平低于阈值30％时， 搅拌速度和溶氧与溶氧30％偶联，发酵阶段转速设为400～600rpm，通气量设 为80～100L/min；

(3)补料培养阶段：当A600值达到15时，基础培养基营养快消耗完， 开始进入补料培养阶段，根据菌量和生长速度，呈指数增加变化流加权利要求 1所述补料培养基，当菌生长到预定的密度时开始加入诱导剂进行诱导，诱导 4～6小时后进行收菌。