[发明专利]大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like及其制备方法与应用

权利要求书

1.大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like基因的编码序列为：

2.大黄鱼抗菌肽Heocidin-like的氨基酸序列为：

3.大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)给出具有序列表中序列1的开放阅读框和系列表中序列2的氨基酸序列；

2)Lc-HepL的ORF克隆；

3)构建表达载体；

4)重组表达载体pET-32a-HepL在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)pLys中转化宿主细胞并对宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物；

5)分离纯化步骤4)得到的表达产物，得到重组蛋白Lc-HepL。

4.如权利要求3所述大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述Lc-HepL的ORF克隆的方法为：利用健康大黄鱼鳃提取总RNA并反转录为cDNA模板，根据GeneBank公布Lc-HepL的cDNA序列设计带有限制性内酶切位点(EcoRI/Xho I)引物，克隆获得Lc-HepL的ORF中除编码信号肽的序列。

5.如权利要求3所述大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述构建表达载体的具体方法为：将步骤2)中获得的带有酶切位点的Lc-HepL的ORF序列及pET-32a质粒进行EcoRI/Xho I双酶切暴露粘性末端，使用T4连接酶进行连接，构建表达载体，重组质粒命名为pET-32a–Lc-HepL。

6.如权利要求3所述大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述表达载体选用pET-32a。

7.如权利要求3所述大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述宿主细胞选用E.coli BL21(DE3)pLysS。

8.如权利要求3所述大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like的制备方法，其特征在于在步骤5)中，先将步骤4)所得的表达产物进行亲和层析，再进行透析。

9.如权利要求3～8中所述方法制备的大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like在制备抗虫药物中应用。

10.如权利要求3～8中所述方法制备的大黄鱼抗菌肽Hepcidin-like在制备作为水产养殖业中防治病害的饲料添加剂中应用。