[发明专利]一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法及其试剂盒，以及普利卡那肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，该方法通过氧化反应将线性肽液相合成为具有两对二硫键的多肽。现有的技术中主要采用固相合成将线性肽合成为具有两对二硫键的多肽，但效果较差，收率偏低，为此，申请人通过大量的实验对如何将线性肽合成为具有两对二硫键的多肽作了针对性地研究，发现采用通过氧化反应以及液相合成的方式可以一步将线性肽合成为具有两对二硫键的多肽，避免线性肽成环步骤在溶液中分两次进行，导致溶液中成分复杂，分离纯化难度大而且收率低，本技术方案采用氧化反应加液相合成的方式来合成具有两对二硫键的多肽是具有很高的创新性，是一项创造性成果。

技术领域

本发明属于制药技术领域，尤其是涉及一种通过对线性肽进行氧化反应，将其液相合成为具有两对二硫键的多肽的制备方法及其试剂盒。

背景技术

普利卡那肽是一种鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体激动剂，其治疗机理与利尿钠肽尿鸟苷素相似，可诱导液体分泌进入胃肠道，从而增加胃肠动力。普利卡那肽为一类新的口服制剂，无需注射就可以直接口服用药，可为众多患者接受。这类制剂模仿利钠肽Uroguanylin的作用，诱导肠液分泌的胃肠道进入管腔。其作为一种可模拟胃肠液体调节肽效应的新药，对成人慢性特发性便秘的客观指标和患者自评转归有效。但是，普利卡那肽的制备方法目前在国际上仍属空白，至今尚无适合大规模生产且收率高、杂质含量低的普利卡那肽的制备方法报道。如深圳翰宇药业首先报道的普利卡那肽的制备方法(专利号为CN103694320A)，采用了固相合成线性多肽，然后在溶液中分两步分别成环得到。由于该方法成环在溶液中分两次进行，溶液中成分复杂，分离纯化难度较大，收率较低。随后，南京工业大学报道了另一种合成普利卡那肽的方法(专利号为CN104628827A)，采用Fmoc固相合成路线，先合成线性肽，然后在树脂上定向氧化形成两对二硫键，最后切割纯化后直接得到普利卡那肽，而上述方案由于在固相上合成两对二硫键，收率同样不高。因此，急需提供一种合成条件温和、工艺简单、具有高收率的用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法及其试剂盒，以及普利卡那肽的制备方法，该方法工艺简单、稳定并且具有相对高的收率。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

通过氧化反应将线性肽液相合成为具有两对二硫键的多肽。应理解所述线性肽为内部没有成环的多肽。

需要说明的是，现有的技术中主要是采用固相氧化合成为具有两对二硫键的多肽，但效果较差，收率偏低，在专利号为CN103694320A的专利中，提到了其产物的收率只有30％左右，为此，申请人通过大量的实验对如何将线性肽合成为具有两对二硫键的多肽作了针对性地研究，发现采用通过氧化反应以及液相合成的方式可以一步将线性肽合成为具有两对二硫键的多肽，避免线性肽成环步骤在溶液中分两次进行，导致溶液中成分复杂，分离纯化难度大而且收率低，本技术方案采用氧化反应加液相合成的方式来合成具有两对二硫键的多肽是具有很高的创新性，是一项创造性成果。

通过氧化反应将线性肽液相合成为具有两对二硫键的多肽时，加入氧化剂；

优选的，所述氧化剂为DHS以及NCS，最优为DHS；

优选地，所述氧化剂与线性肽的质量比为30g/g-90g/g；

更加优选的，当氧化剂为DHS时，氧化剂与线性肽的质量比为30g/g-90g/g，最优为60.75g/g；

更加优选的，当氧化剂为NCS时，氧化剂与线性肽的质量比为30g/g-90g/g，最优为60.75g/g。

经过申请人大量的实验验证，与其它氧化剂(双氧水、空气、二甲亚砜等氧化剂)相比，氧化剂为DHS、NCS时技术效果相对较好，具有相对高的收率。