[发明专利]一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法及其试剂盒，以及普利卡那肽的制备方法

权利要求书

1.一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，其特征在于，通过氧化反应将线性肽液相合成为具有两对二硫键的多肽。

2.根据权利要求1所述的一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，其特征在于，通过氧化反应将线性肽液相合成为具有两对二硫键的多肽时，加入氧化剂；

优选的，所述氧化剂为DHS以及NCS，最好为DHS；

优选地，所述氧化剂与线性肽的质量比为30g/g-90g/g；

更加优选的，当氧化剂为DHS时，氧化剂与线性肽的质量比为30g/g-90g/g，最优为60.75g/g；

更加优选的，当氧化剂为NCS时，氧化剂与线性肽的质量比为30g/g-90g/g，最优为60.75g/g。

3.根据权利要求1所述的一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，其特征在于，所述线性肽具有四个Cys，每两个Cys通过氧化反应形成一对二硫键，优选的，线性肽中的两对Cys同时通过氧化反应形成两对二硫键。

4.根据权利要求2所述的一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，其特征在于，通过氧化反应将线性肽液相合成为具有两对二硫键的多肽时，加入纯化水、变性剂、pH调节剂，然后加入稳定剂、氧化剂，接着降低温度，最后加入线性肽进行反应得到具有两对二硫键的多肽；

优选的，所述纯化水、变性剂、稳定剂、氧化剂以及线性普利卡那肽的加入量分别为50，000-200，000质量份、50-500质量份、10-100质量份以及20-200质量份，优选为90，000质量份、200质量份、50质量份、50质量份以及82.3质量份；

更加优选的，所述氧化剂为DHS时，DHS与普利卡那肽线性粗肽的摩尔比为(1-20)：1；最优为(5-15)：1；

更加优选的，所述氧化剂为NCS时，所述纯化水、变性剂、稳定剂、氧化剂以及线性普利卡那肽的摩尔比为(1-20)：1；最优为(5-15)：1；

优选的，所述变性剂为盐酸胍、精氨酸、尿中的一种或多种；更加优选的，所述变性剂为盐酸胍；

优选的，pH调节剂为碳酸铵、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氨水中的一种或多种；更加优选的，PH调节剂为碳酸氢钠；

优选的，稳定剂为乙二醇、木糖醇、肌醇其中的一种或多种；更加优选的，稳定剂为乙二醇；

优选的，温度降低为-25至-30℃，更加优选的，温度降低到-10℃至-15℃；优选的，反应时的PH值为7.5-13，更加优选为9-11，最好为10。

5.根据权利要求1所述的一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，其特征在于，还包括通过裂解含有线性肽的树脂制得线性肽；

或通过氨基酸液相合成制得线性肽。

6.根据权利要求5所述的一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，其特征在于，所述含有线性肽的树脂通过树脂逐一偶联氨基酸制得；

优选的，所述含有线性肽的树脂通过在固相树脂上按照碳端到氮端的顺序逐一偶联Leu、Cys 15、Gly、Thr、Cys 12、Ala、Val、Asn、Val、Cys 7、Leu、Glu、Cys 4、Glu、Asp、Asn制备得到。

7.根据权利要求1-6任一项所述的一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法，其特征在于，所述多肽为普利卡那肽，所述线性肽为线性普利卡那肽。