[发明专利]用于DNA编码化合物库合成中酶链反应的T4 DNA连接酶缓冲液及其应用有效
| 申请号： | 201811187566.4 | 申请日： | 2018-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN109439710B | 公开（公告）日： | 2021-05-07 |
| 发明（设计）人： | 吴阿亮;舒启胜;安玉龙;杨琪;袁堂蜜;龚平秀;袁友浪;张在红;李科;裴增飞;陈雯婷;蒯乐天;杨洪芳;彭宣嘉 | 申请（专利权）人： | 上海药明康德新药开发有限公司;无锡生基医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 郑权 |
| 地址： | 200131 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 dna 编码 化合物 合成 中酶链 反应 t4 连接酶 缓冲液 及其 应用 | ||
1.一种用于DNA编码化合物库构建中双链DNA片段之间的链接的T4 DNA连接酶缓冲液，其特征在于，所述T4 DNA连接酶缓冲液为无DTT的10X T4 DNA连接酶缓冲液，其配方是500mM Tris-HCl，100mM MgCl2，5～20mM ATP，pH 8.0。
2.如权利要求1所述的T4 DNA连接酶缓冲液，其特征在于，ATP的终浓度是5mM，6mM，7mM，8mM，9mM，10mM，11mM，12mM，13mM，14mM，15mM，16mM，17mM，18mM，19mM，或20mM。
3.一种用于DNA编码化合物库构建中双链DNA片段之间的链接的T4 DNA连接酶缓冲液，其特征在于，所述T4 DNA连接酶缓冲液为无Tris的2X T4 DNA连接酶缓冲液，其配方是40mM磺酸类试剂，20mM MgCl2，1～5.0mM ATP，8％的1,3-丙二醇，2.0mM DTT，pH8.0。
4.一种用于DNA编码化合物库构建中双链DNA片段之间的链接的T4 DNA连接酶缓冲液，其特征在于，所述T4 DNA连接酶缓冲液为无Tris，无DTT的2X T4 DNA连接酶缓冲液，其配方是40mM磺酸类试剂，20mM MgCl2，1～5.0mM ATP，8％的1,3-丙二醇，pH 8.0。
5.如权利要求3或4所述的T4 DNA连接酶缓冲液，其特征在于，磺酸类试剂是4-羟乙基哌嗪乙磺酸，N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸，2-(N-吗啉)乙磺酸，3-(N-玛琳代)丙磺酸，N-2-羟乙基哌嗪-N'-3-丙磺酸，或2-[(三(羟甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸钠。
6.如权利要求3或4所述的T4 DNA连接酶缓冲液，其特征在于，ATP终浓度是1.0mM，1.5mM，2.0mM，2.5mM，3.0mM，3.5mM，4.0mM，4.5mM，或5.0mM。
7.如权利要求1所述的T4 DNA连接酶缓冲液在DNA编码化合物库构建中用于双链DNA片段之间的链接后下一步有Pd参与的反应的应用。
8.如权利要求3所述的T4 DNA连接酶缓冲液在DNA编码化合物库构建中用于双链DNA片段之间的链接后下一步有小分子胺或可以与小分子胺反应的有机小分子试剂参与的有机反应的应用。
9.如权利要求4所述的T4 DNA连接酶缓冲液在DNA编码化合物库构建中用于双链DNA片段之间的链接后下一步有小分子胺或可以与小分子胺反应的有机小分子参与的，且有Pd参与的金属反应的应用。
10.如权利要求7-9任一项所述的应用，其特征在于，酶链反应的最终反应液中T4 DNA连接酶缓冲液是0.1X～2.0X。
11.如权利要求7-9任一项所述的应用，其特征在于，该T4 DNA连接酶缓冲液参与的酶链反应是应用于单个离心管反应或应用于96孔板反应。
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