[发明专利]一种NK细胞无血清培养基

说明书

本发明涉及细胞培养的技术领域，公开了一种NK细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素；本发明提供了一种NK细胞无血清培养基，具有如下优点：(1)、培养基成分明确，稳定性高，且市场来源基本不受限制，容易购得。(2)、采用本发明制备的培养基，提升细胞的扩增效率和保证NK细胞的专一性，可以在简化细胞分离和培养步骤的情况下，得到高品质的细胞。(3)、本发明制备的无血清培养基，无成分不明的异源蛋白，避免细胞污染和减少细胞制剂的安全隐患，有利于临床应用。

技术领域

本发明涉及细胞培养的技术领域，尤其是一种NK细胞无血清培养基。

背景技术

NK细胞(Natural killer cells，NK cells)即自然杀伤细胞，是机体天然免疫系统的重要组成部分，也是抗病毒、抗肿瘤的重要组成细胞。研究表明，大多数肿瘤患者体内NK细胞数量下降和或NK细胞的清除癌细胞的能力下降，NK细胞表面活化受体和抑制受体的表达决定其抗肿瘤能力的强弱。肿瘤患者及肿瘤术后患者体内NK细胞的数量及活性都发生了一定的改变。肿瘤的发生、发展及转移与NK细胞的抗肿瘤免疫功能被抑制有密切的联系。

正常人体内NK细胞主要存在于外周血循环中，占NK细胞总数的90％。但NK细胞在外周血中的中的比例含量少(只约占淋巴细胞的5％-7％)，因此不管在实验研究还是临床治疗应用，NK细胞都必须进行体外培养和扩增，以达到理想的研究和治疗所需的状态。

目前，常见的NK细胞体外扩增和活化的方案中，为了提高扩增效果，使用添加了动物血清(如FBS)的培养基。但是动物血清成分复杂，且不同批次的动物血清难以做到一致性和稳定性，还可能会带来支原体、细菌、病毒或蛋白传染性疾病等污染。另外动物血清带来的异种蛋白，也会增加NK细胞在临床应用中的风险，异种蛋白会引起免疫反应、过敏反应和炎性反应等免疫排斥反应。因此含血清的细胞培养基限制了NK细胞在临床上的应用。

为适应临床应用的需要，利用无血清培养基(或者在基础培养基中添加血清替代物)培养NK细胞的方法被使用。但是目前市场上使用的无血清培养基往往不能达到有血清培养基的效果，同时大多数无血清培养基是培养免疫细胞的通用培养基，而没有特别有效的专门培养NK细胞的无血清培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供一种NK细胞无血清培养基，旨在解决现有技术中缺乏一种特别有效的专门培养NK细胞的无血清培养基的问题。

本发明是这样实现的，一种NK细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素。

进一步地，所述添加物中的组分的浓度为：白蛋白(1g/L)、油酸(0.05-0.2mg/L)、亚油酸(0.2-0.5mg/L)、胰岛素(5-10mg/L)。

进一步地，所述添加物中的氨基酸包括L-酪氨酸(30mg/L)、L-胱氨酸(70mg/L)、L-谷氨酰胺酸(50mg/L)、L-谷氨酰胺(350mg/L)、甘氨酸(20mg/L)、L-缬氨酸(60mg/L)、L-色氨酸(20mg/L)、L-苯丙氨酸(30mg/L)、L-丝氨酸(20mg/L)和L-苏氨酸(60mg/L)。

进一步地，所述缓冲剂包括L-磷酸甘油二钠盐水合物(1g/L)和4-羟乙基哌嗪乙磺酸(1g/L)。

进一步地，所述添加物中的组分的浓度为：白蛋白(1g/L)、油酸(0.12mg/L)、亚油酸(0.35mg/L)、胰岛素(7.5mg/L)。

进一步地，所述白蛋白为人血白蛋白。

进一步地，所述基础培养基为RPMI1640无血清培养基。

进一步地，所述添加物还包括D葡萄糖。

进一步地，所述D葡萄糖的浓度为：1-5g/L。