[发明专利]一种伊维菌素衍生物和抗阿维菌素类药物的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种新型伊维菌素半抗原，它是在伊维菌素C₄‑OH位置，与羧甲基羟胺半盐酸盐反应，将C₄上的羟基取代为羧甲基羟胺基，该衍生物与载体蛋白偶联后作为免疫原，可用于制备抗阿维菌素类药物的单克隆抗体。本发明还公开了一种广谱的抗阿维菌素类药物的单克隆抗体，该单克隆抗体能同时特异性识别阿维菌素、伊维菌素、埃普利诺菌素和埃玛菌素，用该单克隆抗体建立的酶联免疫方法和试剂盒适用于检测动物组织中阿维菌素类药物残留，具有检测灵敏，准确度高，精密度好等优点。

技术领域

本发明涉及一种新的伊维菌素衍生物及其在制备抗阿维菌素类药物的单克隆抗体中的应用，本发明还涉及一种抗阿维菌素类药物的单克隆抗体及其应用。

背景技术

阿维菌素类药物包括阿维菌素(AVM)、伊维菌素(IVM)、埃普利诺菌素(EPR)、塞拉菌素(SEL)、莫西菌素(MOX)、多拉菌素(DOR)和埃玛菌素(EMA)等，属于大环内酯类药物，广泛用于治疗和预防动物寄生虫病及农产品中的昆虫和螨虫防治。阿维菌素类药物脂溶性极高，残留在动物机体内的药物很难降解。研究表明阿维菌素类药物具有神经毒性、肝毒性及免疫毒性且可能具有生态毒性。鉴于这类药物对人类健康及生态环境的危害，世界各国都严格规定了它们在动物可食性组织中的最大残留限量(MRLs)。

残留检测方法是准确判断药物残留是否超标的重要手段，必须具有较高的精确度和准确度。目前用于阿维菌素类检测的方法主要有仪器分析法和免疫学检测方法。仪器分析法主要有液相色谱-荧光(HPLC-FLD)、液相色谱法-紫外(HPLC-UV)和超液相色谱法-质谱法(LC/MS)等。这些仪器分析方法灵敏度高，能够多残留检测。但是检测时间长、成本高、样品前处理繁杂，需要使用大量有机试剂，且对操作人员要求较高，很难做到现场、低成本、快速、大批量的检测。

免疫学检测方法，尤其是ELISA方法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点，能够克服仪器分析的缺陷，许多经典的分析方法在灵敏度和特异性方面都不能与之相比，是一种有效的大批量残留筛选方法，但是现有的免疫学方法存在检测种类少，特异性不高，灵敏度差等缺点。

如CN 1811440A公开了一种伊维菌素半抗原，它是在伊维菌素的分子结构上直接把突出的4-羟基酯化成羧基，该半抗原制备的抗体仅用于伊维菌素的检测，最低检测限为0.5μgL^-1。

CN 103675287A公开了一种伊维菌素的检测试剂盒，它以伊维菌素代谢物为半抗原制备单克隆抗体，但没有公开是何种代谢物，且只能检测伊维菌素，最低检测限为0.01ngmL^-1。

CN 104280557 A公开了一种检测阿维菌素的酶联免疫试剂盒，半抗原是阿维菌素，所制备的抗体IC₅₀平均值为2.3μg L^-1，对埃比菌素和伊维菌素有一定交叉反应；该试剂盒对鸡肉样品的最低检测限为1.6μg kg^-1，对鸡肝样品的最低检测限为1.8μg kg^-1，

CN 102928407 A公开了检测阿维菌素类药物的磁颗粒化学发光试剂盒，将阿维菌素用二溴丁二酸法和戊二酸酐法合成阿维菌素类药物半抗原，对阿维菌素的检测灵敏度为0.02ng mL^-1，对埃普菌素、依维菌素有交叉反应。

可见，现有技术中针对阿维菌素类药物的免疫检测，大多数半抗原的设计都在AVM或IVM的C₄-OH位置连接琥珀酸酐或戊二酸酐得到含有4或5个C的间接臂的半抗原，再与载体蛋白偶联作为免疫原，获得的抗体广谱性差，且检测样品种类单一，使得该类方法的应用受到一定局限。

发明内容