[发明专利]一种视神经萎缩动物模型的构建方法、试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种视神经萎缩动物模型的构建方法、试剂盒和应用。涉及生物技术领域。该构建方法通过使动物OPA3基因2号外显子第277位点的碱基由G突变为A，进而使编码的OPA3蛋白的第93位发生错义突变，由氨基酸残基G突变为S；得到含有该突变的动物表现出典型的视神经萎缩疾病特征，可作为视神经萎缩动物模型；该动物模型填补了目前无人源常染色体显性视神经萎缩动物模型的欠缺，丰富了现有视神经萎缩动物模型的类别，有利于促进眼科疾病的研究发展。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种视神经萎缩动物模型的构建方法、试剂盒和应用。

背景技术

人类OPA3基因位于19q13.32，其编码的OPA3蛋白是线粒体融合蛋白之一。该基因有多个突变位点，例如IVS1-1G-C、18-BP DEL、和313C-G(Q105E)。前两种突变导致临床疾病为III型3-甲基戊烯二酸尿症，表现为强直，共济失调，认知障碍等中枢神经系统疾病的症状，为常染色体隐性遗传病；第三种突变导致视神经萎缩伴或不伴白内障和轻微神经系统症状，为常染色体显性遗传病。

虽然目前已发现的因突变导致遗传性视神经萎缩的致病基因有数十种，但现有的动物模型还只是由ENU诱变得到的OPA1(Q285STOP)小鼠和OPA3(L122P)小鼠。虽然在表型上能够模拟遗传性视神经萎缩的病征，但大多是隐性遗传病，缺乏显性遗传的视神经萎缩的动物模型。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种视神经萎缩动物模型的构建方法，通过该构建方法可以得到常染色体显性遗传的视神经萎缩动物模型，且表现出典型的视神经萎缩特征，为研究眼科疾病例如视神经萎缩提供了另一种选择，填补了目前无人源常染色体显性视神经萎缩动物模型的欠缺，丰富了现有视神经萎缩动物模型的类别。

本发明的另一目的在于提供一种用于构建视神经萎缩动物模型的试剂盒，采用该试剂盒可以方便、简单、快速地构建出常染色体显性遗传的视神经萎缩动物模型。

本发明的再一目的在于提供由上述构建方法得到视神经萎缩动物模型在眼科疾病研究中的应用。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供了一种视神经萎缩动物模型的构建方法，其包括：将用于使动物OPA3基因2号外显子第277位点G突变为A的组合物注射到动物受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕雌性动物体内，产出的动物作为F0代动物。

本发明的研究显示，使动物OPA3基因2号外显子第277位点的碱基由G突变为A(突变c.277GA)，导致其编码的OPA3蛋白的第93位发生错义突变，由氨基酸残基G突变为S(G93S)，进而使得该动物表现出常染色体显性遗传的视神经萎缩特征，且纯合型的视神经萎缩特征较杂合型的表现更明显。

通过本发明的方法，可以构建出视神经萎缩动物模型，其OPA3基因2号外显子第277位点的碱基由G突变为A，其编码的OPA3蛋白的第93位由氨基酸残基G突变为S，该视神经萎缩动物模型为常染色体显性遗传，其表现出典型的视神经萎缩特征。这为研究眼科疾病例如视神经萎缩提供了另一种选择，填补了目前无人源常染色体显性视神经萎缩动物模型的欠缺，丰富了现有视神经萎缩动物模型的类别。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述构建方法还包括：将经鉴定正确的体细胞OPA3基因的2号外显子第277位点G突变为A的F0代动物与野生型异性动物交配以获得F1代杂合子动物。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述构建方法还包括：

将经鉴定正确的体细胞OPA3基因的2号外显子第277位点G突变为A的F1代杂合子动物自交，得到F2代动物，即为视神经萎缩动物模型。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述动物为非人哺乳动物。