[发明专利]一种评估CART细胞体内代谢的方法

说明书

本发明提供了一种评估CART细胞临床前药代的方法。具体发明为体内实验评估，系统的阐述了CART细胞进入临床前的药代学检测指标。

技术领域

本发明涉及医药生物领域，具体涉及一种CART细胞制备方法。

背景技术

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T细胞是指经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。CAR-T细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式。大量研究表明，CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善患者的生存状况。

嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段)，一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。目标抗原的选择对于CAR的特异性、有效性以及基因改造T细胞自身的安全性来讲都是关键的决定因素。

CART细胞在做临床实验之前要系统的做药效、药代、药动、药理、毒理的评估，全面摸清CART细胞的安全性有效性。本发明系统阐述CART临床前药物代谢评估方法。

发明内容

本发明的一个方面提供一种评估CD19-CART细胞体内代谢方法包括体内实验评估方法。

本发明的第二方面提供了体内实验评估方法，包括：

(Ⅰ)抗人CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠给药模型；

(Ⅱ)抗人CD19 CART细胞液注射非荷瘤鼠给药模型；

(Ⅲ)抗鼠CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠模型。

本发明的第三方面提供了抗人CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠给药模型具体造模方法，包括小鼠尾静脉注射Raji淋巴瘤细胞建立疾病模型，24小时后尾静脉注射CAR阳性T细胞或相同细胞总数的对照细胞，分别于CAR-T/NT细胞注射后固定时间点采集小鼠外周血，流式细胞计数法检测T细胞百分比、CAR+细胞比例及CD19⁺肿瘤细胞比例，研究CAR-T细胞在NOG小鼠血液中的增殖、存续及与肿瘤生长的相关性。

本发明的第四方面提供了抗人CD19 CART细胞液注射非荷瘤鼠给药模型具体造模方法，包括每只小鼠尾静脉注射CAR阳性T细胞。注射CAR-T细胞后于固定时间点进行解剖。解剖取血液、骨髓、脾脏组织利用流式细胞仪检测其中T细胞含量和CAR的表达。

本发明的第五方面提供了抗鼠CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠模型具体造模方法为小鼠皮下注射A20肿瘤细胞建立疾病模型，待肿瘤体积达到100mm3左右时，模拟临床预处理方式采用环磷酰胺注射液腹腔注射对小鼠进行预处理。24h后尾静脉注射鼠源CAR-T细胞。观察期为给药后60天，评估内容包括：定期测量小鼠肿瘤大小；取各组织样品，流式检测T细胞比例和肿瘤细胞负荷。

本发明具有以下有益效果：本发明全面的评估CD19 CART细胞临床前体内代谢方法。

附图说明

图1抗人CD19CART细胞注射液药代学实验模型图

具体实施方式

实施例