[发明专利]一种无血清培养基

说明书

本发明公开了一种无血清培养基，所述培养基包含以下组分：DMEM/F12；以及在DMEM/F12中添加：0.6‑300ng/mL生长因子、15‑120μg/L激素、3‑150mg/mL蛋白质、0.1‑1.7g/L氨基酸及肽、6.51‑13.1mg/L脂质复合物、22‑220μg/L微量元素、0.5‑5.9mg/L维生素。本发明涉及一种细胞培养基，特别是用于培养悬浮细胞的培养基，其用于重组蛋白的表达，本发明培养基，完全不含有血清成份；生产的抗体纯度大幅度提高；该培养基同时具有高扩增速度及高抗体表达能力；该培养基能长时间保持细胞活性，细胞培养时间大大延长，可以大大延长生产时间，提高抗体产量。

技术领域

本发明涉及一种细胞无血清培养基，属于细胞培养技术领域。

背景技术

无血清培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基，可以应用于培养哺乳动物细胞，例如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、犬肾细胞(MDCK)、猴肾细胞(Vero)、乳仓鼠肾细胞(BHK)等。

目前已广泛采用细胞培养来生产多种生物活性制品，如病毒疫苗、单克隆抗体、非抗体免疫调节剂、多肽生长因子、激素、酶、肿瘤特异性抗原等。这些产品可通过正常的或转化的和经基因工程改造的细胞产生。

以往，用于细胞培养的培养基需要添加血清，作为生产生物活性产品的所有哺乳动物细胞系生长和维持所需的通用营养物质。血清含有激素、生长因子、载体蛋白质、粘附和扩散因子、营养成分、微量元素等。培养基通常含有高达约10％的动物血清，例如胎牛血清(FBS)，也称为胎犊血清(FCS)。

虽然广泛采用了血清，但是其有许多缺点，如产物纯化难度加大、来源限制、批次间生物活性差异(导致过程不稳定)、生物污染(如疯牛病)等。因此，研究含已知成分的无血清培养基成为细胞培养领域中一项重要工作。

目前，市售的培养基培养的细胞扩增倍数低、存活时间短、活性低、产量不高、且抗体纯度低，不能满足临床应用的问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，开发出一种高效安全稳定的无血清培养基。

为了实现上述要求和目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种无血清培养基，所述培养基包含以下组分：

DMEM/F12；

以及在DMEM/F12中添加：

0.6-300ng/mL生长因子、15-120μg/L激素、3-150mg/mL蛋白质、0.1-1.7g/L氨基酸及肽、6.51-13.1mg/L脂质复合物、22-220μg/L微量元素、0.5-5.9mg/L维生素。

本发明中，在DMEM/F12中添加0.6-300ng/mL生长因子表示的是在1mLDMEM/F12中添加0.6-300ng的生长因子，其他添加组分所表达的含义与此相同，即μg/L、g/L、mg/L中的L均是指作为添加基础的DMEM/F12的量。

优选地，所述的生长因子包括如下组分及含量：

成纤维细胞生长因子0.1-50ng/mL、重组人表皮细胞生长因子(EGF)0.1-50ng/mL、神经生长因子0.1-50ng/mL、转化生长因子0.1-50ng/mL、白血病抑制因子0.1-50ng/mL、胰岛素样生长因子-1 0.1-50ng/mL。

优选地，所述的激素包括如下组分及含量：

氢化可的松12-60μg/L、胰岛素2-20μg/L、孕酮0-20μg/L、地塞米松1-20μg/L。

优选地，所述的蛋白质包括如下组分及含量：