[发明专利]一种高特异性热启动型环介导等温扩增体系及扩增方法在审
| 申请号： | 201810739513.2 | 申请日： | 2018-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN108929897A | 公开（公告）日： | 2018-12-04 |
| 发明（设计）人： | 叶辛;方雪恩;孔继烈 | 申请（专利权）人： | 上海速创诊断产品有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人： | 俞涤炯 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 环介导等温扩增 金纳米颗粒 热启动 扩增 吸附 等温扩增体系 常温下 错配 检测 延伸 | ||
1.一种高特异性热启动型环介导等温扩增体系，其特征在于，所述等温扩增体系包括引物、Bst DNA聚合酶和金纳米颗粒，其中，所述金纳米颗粒与引物、Bst DNA聚合酶之间通过吸附结合。
2.根据权利要求1所述的等温扩增体系，其特征在于，所述金纳米颗粒的颗粒尺寸为5nm～15nm，所述金纳米颗粒的加入量为4ng～100ng。
3.根据权利要求1所述的等温扩增体系，其特征在于，所述引物采用如SEQ ID NO：2～5所示序列。
4.根据权利要求1所述的等温扩增体系，其特征在于，所述等温扩增体系中的等温扩增缓冲液包括：Tris-HCl(pH 8.8@25℃)、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4、Tween-20。
5.根据权利要求1所述的等温扩增体系，其特征在于，所述等温扩增体系为25μL，其中各组分及其浓度为：20mM Tris-HCl(pH 8.8@25℃)、10mM KCl、10mM(NH4)2SO4、8mM MgSO4、0.1％Tween-20、0.2μM F3/B3、1.6μM FIP/BIP、8U Bst DNA聚合酶、dNTPs(each 1.4mM)、1×SYBR green、20ng金纳米颗粒，所述金纳米颗粒的尺寸为5nm。
6.一种如权利要求1-5中任一项所述的高特异性热启动型环介导等温扩增体系的扩增方法，其特征在于，将金纳米颗粒直接加入LAMP反应体系中，金纳米颗粒与引物及Bst DNA聚合酶吸附，得到等温扩增体系，以样品DNA为模板进行环介导等温扩增，得到环介导等温扩增产物。
7.根据权利要求6所述的等温扩增方法，其特征在于，金纳米颗粒与引物之间通过金与DNA序列中碱基上的氮原子产生亲和吸附，金纳米颗粒与Bst DNA聚合酶之间通过正负电荷产生静电吸附。
8.根据权利要求6所述的等温扩增方法，其特征在于，所述等温扩增反应的温度为65℃，反应时间为90min。
9.一种含有如权利要求1-5所述的等温扩增体系的试剂盒。
10.一种如权利要求1-5所述的等温扩增体系在A群轮状病毒检测中的应用。
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