[发明专利]一种马铃薯StDWF1基因及其制备方法以及过表达该基因以促进马铃薯快速生根的方法

说明书

本发明提供一种马铃薯StDWF1基因及其制备方法以及过表达该基因以促进马铃薯快速生根的方法，涉及马铃薯分子生物学领域，通过StDWF1基因克隆、过表达载体构建、农杆菌浸染转入等步骤实现通过过表达马铃薯StDWF1基因促进马铃薯快速生根的目的，至少提前10天生根，有利于增强马铃薯植株生长长势。

技术领域

本发明涉及马铃薯分子生物学领域，具体涉及一种马铃薯StDWF1基因及其制备方法以及过表达该基因以促进马铃薯快速生根的方法。

背景技术

马铃薯是我国第四大主粮，具备产量高、营养丰富、可食用加工等特点，对粮食安全保障具有重要意义；但每年因马铃薯贮藏不当而造成的损失惨重，对马铃薯产业有着巨大的冲击。

马铃薯在食用上男女老少皆可食用，市场需求大，因此提高马铃薯产量很有必要，但在马铃薯生长过程中，只有当其根系在生长到一定长度才会产生果实，目前马铃薯的生长周期为80-120天，生长周期不能满足市场需求，要缩短马铃薯生长周期，提高生根速度，减少生根时间是行之有效的手段。

发明内容

本发明提供一种马铃薯StDWF1基因，通过基因改变马铃薯的休眠时间以及生根时间，使之平衡马铃薯贮藏与生长的矛盾。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种马铃薯StDWF1基因，其碱基序列如SEQ ID NO:1所示。

一种马铃薯StDWF1基因的制备方法，包括如下步骤：

(1)从马铃薯品种费乌瑞它试管苗中提取总RNA；

(2)根据提取的总RNA反转录合成cDNA；

(3)PCR扩增，以cDNA为模板，在cDNA的CDS区前引入XbaI和SmaI酶切位点，设计扩增引物StDWF1PF和StDWF1PR，并添加引物StDWF1PF、引物StDWF1PR、10×扩增缓冲液、无菌水、dNTPs、Taq DNA聚合酶混匀并进行PCR扩增，其中，cDNA、引物StDWF1PF、引物StDWF1PR、10×扩增缓冲液、无菌水、dNTPs、Taq DNA聚合酶的容积分别为：1μL、1μL、1μL、2μL、15.3μL、0.5μL、0.2μL，并且cDNA、引物StDWF1PF、引物StDWF1PR以及dNTPs的浓度分别为10～100ng/L、2μM/μl、2μM/μl、10mmol/L；

扩增引物StDWF1 PF、StDWF1 PR的碱基序列分别如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示；

(4)回收纯化PCR扩增产物，经测序分析得到马铃薯StDWF1基因。

作为优选地，步骤(1)中，提取费乌瑞它试管苗总RNA的时机是叶片出苗期，提取部位是费乌瑞它试管苗的嫩叶。

作为优选地，步骤(1)中总RNA的提取方法采用Trizol法，具体步骤如下：

(1a)研磨：研钵放入4勺液氮和马铃薯品种费乌瑞它样品部位，液氮挥发完后迅速磨成细粉，迅速装入EP管后加1mL Trizol，剧烈混匀，室温放5-10min；

(1b)4℃12000rpm离心5min，吸取上清至新管中，并加入200ml氯仿，轻微上下摇晃，室温静置5min；

(1c)4℃12000rpm离心10min，吸取上清液到新管，加入等体积酚/氯仿/异戊醇，颠倒混匀；

(1d)4℃12000rpm离心20min，吸取上清液到新管，逐渐加入无水乙醇使其终浓度为12％，上下颠倒混匀后迅速离心；