[发明专利]一种大肠菌群的检测方法

说明书

本发明涉及到一种大肠菌群的检测方法，包括如下步骤：S1、取25g样品，剪碎；S2、将样品均质处理；S3、将S2中的悬浮液在离心机中以1000‑1500r/s的速度离心4min；S4、去除表层油状液体；S5、均质剩余物质，加入助滤剂，滤过28～32μm的一级滤膜；S6、取滤后液过0.2~0.45μm的二级滤膜；S7、洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上；S8、收集大肠菌体进行检测。通过将样品均质并将悬浮液低速离心，使得油性物质上浮于表面，吸取表层油状液体并弃之，防止油状物质对后续实验产生影响；加入助滤剂，能够促进过滤、去除色素；通过一级过滤，去除大颗粒渣粒，通过二级过滤，去除干扰物去除小分子干扰物质，达到菌体分离富集，随后收集菌体。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，更具体地说，它涉及一种大肠菌群的检测方法。

背景技术

在食品行业，大肠菌群的含量是一项重要的卫生指标。对于大肠菌群的检测方法有传统国家标准方法(GB)采用9管发酵、荧光方法(SN)、显色培养基方法、膜过滤方法等。在检测大肠菌群钱，首先要对检测样品进行菌体分离富集、去除干扰物。

在一些类于夫妻肺片，其含有较多植物油、动物油等油性物质的食品检测大肠菌落时，这些油性物质影响对菌体的分离收集，需要将油性物质去除。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大肠菌群的检测方法，其具有去除油性物质后对菌体进行分离富集的作用。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种大肠菌群的检测方法，包括如下步骤：

S1、在无菌台内取25g样品，剪碎；

S2、将样品在5-10倍无菌盐水中进行均质处理，得到悬浮液；

S3、将S2中的悬浮液在离心机中以1000-1500r/s的速度离心4min；

S4、轻轻吸取表层油状液体，并弃之；

S5、均质S4中的剩余物质，加入助滤剂，并将其以真空过滤法滤过28～32μm的一级滤膜；

S6、取S5中的滤后液过0.2～0.45μm的二级滤膜；

S7、用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上；

S8、收集二级滤膜上的大肠菌体，进行大肠菌群检测。

通过采用上述技术方案，通过将样品剪碎，并用无菌盐水稀释，进行均质，样品中的大肠菌群充分分散，得到悬浮液；将悬浮液低速离心，使得油性物质上浮于表面，且低速离心不影响大肠菌群的活性，利用移液枪吸取表层油状液体并弃之，防止油状物质对后续实验产生影响，吸取要轻防止下层大肠菌群上浮；均匀去除油性物质后剩余的物质，并加入助滤剂，能够促进过滤、去除色素；通过一级过滤，去除大颗粒渣粒，通过二级过滤，去除干扰物去除小分子干扰物质，达到菌体分离富集，随后收集菌体，并进行菌体检测即可。

进一步的，S8中的大肠菌群检测采用MPN法进行检测，具体检测步骤如下：

S8-1、每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)，每管接种1mL，36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，未产气者为大肠菌群阴性，大肠菌群阴性；

S8-2、用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。

通过采用上述技术方案，通过MPN法可检测出大肠菌群的含量。