[发明专利]一种大肠菌群的检测方法

权利要求书

1.一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、在无菌台内取25g样品，剪碎；

S2、将样品在5-10倍无菌盐水中进行均质处理，得到悬浮液；

S3、将S2中的悬浮液在离心机中以1000-1500r/s的速度离心4min；

S4、轻轻吸取表层油状液体，并弃之；

S5、均质S4中的剩余物质，加入助滤剂，并将其以真空过滤法滤过28～32μm的一级滤膜；

S6、取S5中的滤后液过0.2~0.45μm的二级滤膜；

S7、用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上；

S8、收集二级滤膜上的大肠菌体，进行大肠菌群检测。

2.根据权利要求1所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：S8中的大肠菌群检测采用MPN法进行检测，具体检测步骤如下：

S8-1、每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST），每管接种1mL，36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，未产气者为大肠菌群阴性；

S8-2、用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况，产气者，计为大肠菌群阳性管。

3.根据权利要求2所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：S5中的一级滤膜的材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、聚四氟乙烯中的任一种，所述一级滤膜的孔径为30μm。

4.根据权利要求3所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：S6中的二级滤膜为材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、聚四氟乙烯中的任一种，所述二级滤膜的孔径为0.3～0.4μm。

5.根据权利要求4所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：S7中洗涤次数为2-3次，每次洗涤用无菌生理盐水的量为20-50ml。

6.根据权利要求5所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：所述助滤剂为吐温-60或吐温-80，所述助滤剂占稀释溶液的重量百分比为千分之0.5～千分之2。

7.根据权利要求2所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：S8-1中所述月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）包括以下组分组成：蒸馏水1000ml，胰蛋白胨20g，氯化钠5.0g，乳糖5.0g，磷酸氢二钾2.75g，磷酸二氢钾2.75g，月桂基硫酸钠0.1g。

8.根据权利要求7所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：所述月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）的pH值为6.8 ± 0.2。

9.根据权利要求2所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：S8-2中所述煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）包括以下组分组成：蒸馏水1000ml，蛋白胨10g，乳糖10g，牛胆粉20g，煌绿0.0133g。

10.根据权利要求9所述的一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：所述煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）的pH值为7.2±0.1。