[发明专利]人β-防御素2的新用途及其制备方法

说明书

本发明公开了人β‑防御素2的新用途及其制备方法，本发明提出了人β‑防御素2在制备治疗真菌尤其是丝状真菌感染性疾病药物中的应用。本发明提供了重组人β‑防御素2多肽的制备方法，将HBD2成熟肽基因插入pET32a(+)质粒，将构建正确的重组质粒转入大肠杆菌获得表达工程菌，诱导培养表达工程菌表达HBD2融合蛋白，最后再通过镍亲和层析、凝血酶酶切、纯化、浓缩获得重组人β‑防御素2多肽。本发明中提出了人β‑防御素2的新用途。本发明中的方法具有造价低廉、产量多且容易保证多肽的生物学活性的特点。

技术领域

本发明涉及一种活性小分子蛋白质的新用途及其制备方法，特别是人β-防御素2的新用途及其制备方法。

背景技术

近年来，随着广谱抗生素、激素、免疫抑制剂的广泛应用，以及AIDS的蔓延、器官移植和介入技术的推广应用，使真菌感染的发病率呈现上升趋势，2014年的真菌感染率为20世纪90年代的数倍，念珠菌属和曲霉属是目前最常见的真菌感染的病原菌，某些真菌引起的系统性感染致死率高达90％。对于艾滋病患者(AIDS)，真菌感染是最常见的机会性感染，其发病率和死亡率均较高。虽然不同作用机制的抗真菌药物在治疗真菌感染中发挥了重要作用，但随着感染菌种逐渐发生变化，有关耐药菌株的报道逐渐增多，使得真菌感染的治疗面临着严峻的挑战。人β-防御素广泛分布于人、鼠、牛、羊、猪的多种器官上皮细胞内，包括皮肤、呼吸道、尿道、肠道和口腔粘膜上皮细胞等。关于人β-防御素的抗微生物活性，已证实人工合成的人β-防御素具有抗金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的作用。但关于人β-防御素2抗丝状真菌的作用未见相关报道。人工合成的人β-防御素，造价昂贵、产量少且不易保证多肽的生物学活性。

目前，已经运用生物信息学方法发现了大约30种人β-防御素基因。β-防御素的基因上游启动子有前NF-κB、IL-6和STAT等的结合位点，当病原体相关模式分子(PAMP)与上皮细胞表面的模式识别受体(包括CD14，TLRs等)结合后，在多种促炎因子(TNF-α，IL-1)参与下，激活NF-κB等转录因子，再与启动子区的NF-κB、IL-6结合位点结合，使其基因激活并转录和翻译，属于诱导性表达。

因此，现有技术中未发现人β-防御素2抗真菌相关的应用，尤其是抗丝状真菌相关的应用。现有的人β-防御素2的合成方法，存在造价昂贵、产量少且不易保证多肽的生物学活性的问题。

发明内容

本发明的目的，是提供人β-防御素2的新用途及其制备方法。本发明提出了人β-防御素2在制备治疗真菌感染性疾病药物中的应用，尤其是在制备治疗丝状真菌感染性疾病药物中的应用。本发明提供了一种重组人β-防御素2多肽(recombinant human beta-defensin 2,rHBD2)的制备方法。本发明中重组人β-防御素2多肽的制备方法具有造价低廉、产量多且容易保证多肽的生物学活性的特点。

本发明的技术方案：人β-防御素2的新用途，人β-防御素2在制备治疗真菌感染性疾病药物中的应用。

前述的人β-防御素2的新用途中，所述真菌感染性疾病为丝状真菌感染性疾病。

前述的人β-防御素2的新用途中，所述的人β-防御素2为重组人β-防御素2多肽。

前述的人β-防御素2的新用途中，取人β-防御素2，加入一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，制备成各种治疗真菌感染的药物制剂。

前述的人β-防御素2的新用途中，所述的治疗真菌感染的药物制剂为口服制剂：片剂、胶囊剂、口服液、混悬液；或者注射制剂：可注射的溶液、混悬液、粉针剂；或者外用制剂：乳膏剂或溶液。