[发明专利]人β-防御素2的新用途及其制备方法

权利要求书

1.人β-防御素2的新用途，其特征在于：人β-防御素2在制备治疗真菌感染性疾病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的人β-防御素2的新用途，其特征在于：所述真菌感染性疾病为丝状真菌感染性疾病。

3.根据权利要求1或2所述的人β-防御素2的新用途，其特征在于：所述的人β-防御素2为重组人β-防御素2多肽。

4.根据权利要求3所述的人β-防御素2的新用途，其特征在于：取人β-防御素2，加入一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，制备成各种治疗真菌感染性疾病药物制剂。

5.根据权利要求3或4所述的人β-防御素2的新用途，所述重组人β-防御素2多肽的制备方法，其特征在于：根据genbank提供的HBD2基因序列，合成HBD2成熟肽基因；将HBD2成熟肽基因插入pET32a(+)质粒；将构建正确的重组质粒转入大肠杆菌Rossetta-gami(2)，获得表达工程菌Rosseta-gami(2)-pET32a(+)/HBD2；诱导培养表达工程菌Rosseta-gami(2)-pET32a(+)/HBD2表达HBD2融合蛋白，收集菌细胞内容物；通过镍亲和层析将细胞内容物中的HBD2融合蛋白纯化，利用凝血酶酶切HBD2融合蛋白中由pET32a(+)质粒所赋予的标签蛋白，再经镍亲和层析纯化、脱盐、浓缩获得重组人β-防御素2多肽。

6.根据权利要求5所述的重组人β-防御素2多肽的制备方法，其特征在于：所述HBD2成熟肽基因插入pET32a(+)质粒，是先将HBD2成熟肽基因和pET32a(+)质粒用BamHⅠ和XholⅠ分别进行酶切反应，再在T4DNA连接酶的作用下将酶切后的HBD2成熟肽基因和酶切后的pET32a(+)进行连接反应。

7.根据权利要求6所述的重组人β-防御素2多肽的制备方法，其特征在于：所述连接反应中，酶切后的HBD2成熟肽基因与酶切后的pET32a(+)质粒的分子摩尔数比为(3～10):1。

8.根据权利要求7所述的重组人β-防御素2多肽的制备方法，其特征在于：所述表达工程菌Rosseta-gami(2)-pET32a(+)/HBD2经IPTG诱导表达HBD2融合蛋白。

9.根据权利要求8所述的重组人β-防御素2多肽的制备方法，其特征在于：所述工程菌Rosseta-gami(2)-pET32a(+)/HBD2表达HBD2融合蛋白，最优表达条件为：最佳IPTG浓度为0.5mM，最佳诱导时间为6h，最佳温度为34℃。