[发明专利]用于鉴定甘蓝根肿病抗性的分子标记、引物及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及用于鉴定甘蓝类蔬菜根肿病抗性鉴定的分子标记、引物及其应用。本发明利用抗根肿病品种GZ87、GZ87与感病材料263杂交分离后代，结合大量非抗性甘蓝材料，从100条RAPD引物中筛选到两个RAPD标记与根肿病抗性紧密连锁，并在此基础上成功开发出了两个稳定的SCAR标记，其中，CCR‑SCAR1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，CCR‑SCAR2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，两个分子标记中的任意一个均可用于根肿病抗性品种/材料的辅助筛选以及转育根肿病抗性材料的精确鉴定，在十字花科植物根肿病抗性育种中具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及用于鉴定甘蓝根肿病抗性的分子标记、引物及其应用。

背景技术

甘蓝是十字花科芸薹属作物，包含结球甘蓝、花椰菜、抱子甘蓝、球茎甘蓝和芥蓝等不同变种，是世界上主要的蔬菜栽培类型。根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophorabrassicae Woronin)侵染所致，专性寄生十字花科植物根部，引起植株地上部萎蔫，叶片变黄，根生长不良，根部出现肿大的纺锤形或不规则状的根瘤状物的病害。根肿病是一种强传染性的世界性土传病害，甘蓝主产区感染面积呈现逐年加重、蔓延范围逐渐扩大的趋势，给生产上带来巨大的经济损失。因此，选育抗根肿病的甘蓝品种是解决该问题的重要途径，而实现该育种目标的前提是对甘蓝材料的根肿病抗性的有效鉴定和筛选。

目前，根肿病抗性鉴定和筛选的方法主要有两种，一种是利用根肿菌灌根接种苗期植株，该鉴定方法所需时间长，鉴定结果的准确性易受鉴定时的环境条件、温度变化等因素的干扰，为防止根肿病菌的传播，需要建立专门的鉴定圃或者鉴定设施。另一种方法是分子标记辅助选择，即利用与根肿病抗性基因紧密连锁的DNA分子标记进行育种材料根肿病抗性鉴定。该方法不受环境、场地等条件限制，具有鉴定时间短、结果准确、可靠的特点。前期，本实验室结合室内接种鉴定和田间接种鉴定结果，筛选出抗根肿病甘蓝品种GZ87，其中该材料室内接种鉴定的病情指数为6.25，田间病情指数为0。利用该高抗根肿病材料与和高感根肿病的甘蓝自交系杂交，构建了高密度分子标记遗传图谱，但是没有找到与根肿病抗性紧密相关的分子标记，仍然需要传统的根肿病抗性鉴定方法来评价植株抗性。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用于甘蓝根肿病抗性鉴定的分子标记，所述分子标记可用于甘蓝抗根肿病育种材料、品种的快速鉴定以及转育根肿病抗性材料的分子辅助选择。

用于鉴定甘蓝根肿病抗性的分子标记为CCR-SCAR1或CCR-SCAR2，CCR-SCAR1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，CCR-SCAR2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明目的之二是提供分子标记CCR-SCAR1的特异性扩增引物对CCR1和分子标记CCR-SCAR2的特异性引物对CCR2，其中，CCR1的上游引物F-CCR1的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示，CCR1的下游引物R-CCR1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；CCR2的上游引物F-CCR2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，CCR2的下游引物R-CCR2的核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示。

本发明的目的之三是提供上述分子标记和引物应用于甘蓝根肿病抗性鉴定中的方法，所述应用方法包括如下步骤：

(1)以鉴定材料的基因组DNA为模板，分别利用引物对CCR1或引物对CCR2进行PCR扩增获得扩增产物；

(2)将扩增产物进行电泳分离，若存在401bp或355bp条带，则待鉴定材料具有根肿病抗性；若不存在相应条带，则待鉴定材料不具有根肿病抗性。