[发明专利]用于鉴定甘蓝根肿病抗性的分子标记、引物及其应用

权利要求书

1.用于鉴定甘蓝根肿病抗性的分子标记CCR-SCAR1，其特征在于，CCR-SCAR1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述分子标记的PCR特异性扩增引物对CCR1，其特征在于，CCR1的上游引物F-CCR1的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，CCR1的下游引物R-CCR1的核苷酸序列如SEQID No.4所示。

3.用于鉴定甘蓝根肿病抗性的分子标记CCR-SCAR2，其特征在于，CCR-SCAR2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.权利要求3所述分子标记的PCR特异性扩增引物对CCR2，其特征在于，CCR2的上游引物F-CCR2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，CCR2的下游引物R-CCR2的核苷酸序列如SEQID No.6所示。

5.鉴定甘蓝根肿病抗性中的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）以待鉴定材料的基因组DNA为模板，利用引物对CCR1或引物对CCR2进行PCR扩增获得扩增产物；引物对CCR1的核苷酸序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；引物对CCR2的核苷酸序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；

（2）将扩增产物进行电泳分离，若存在401bp或355bp条带，则待鉴定材料具有根肿病抗性，若不存在条带，则待鉴定材料不具有根肿病抗性；所述401bp的条带为引物对CCR1扩增得到的分子标记CCR-SCAR1，CCR-SCAR1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述355bp的条带为引物对CCR2扩增得到的分子标记CCR-SCAR2，CCR-SCAR2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

6.如权利要求5所述方法，其特征在于，利用引物对CCR1或引物对CCR2进行PCR扩增的反应体系如下所示：所述反应体系总体积25μL，其中，浓度100 ng/μL的模板3.0 μL；浓度10μM的引物对CCR1或CCR2 1.0 μL；浓度100 mM的dNTP 0.5 μL；含Mg²⁺ 的10×Taq 缓冲液2.5μL；浓度5 U/μL的Taq DNA 聚合酶0.2 μL；dd H₂O补足25 μL。

7.如权利要求6所述方法，其特征在于，利用引物对CCR1进行PCR扩增的程序为：95℃3min；95℃ 30s、62℃ 30s、72℃ 30s，循环7次；95℃ 30s 、58.5℃ 30s、72℃ 30s，循环22次；72℃ 10min；扩增完成后4℃保存。

8.如权利要求6所述方法，其特征在于，利用引物对CCR2进行PCR扩增的程序为：95℃3min；95℃ 30s、55℃ 30s、72℃ 30s，循环28次；72℃ 10min；扩增完成后保存在4℃条件下。

9.权利要求1所述分子标记CCR-SCAR1或/和权利要求2所述引物对CCR1在鉴定甘蓝根肿病抗性中的应用。

10.权利要求3所述分子标记CCR-SCAR2或/和权利要求4所述引物对CCR2在鉴定甘蓝根肿病抗性中的应用。