[发明专利]一种乌头花叶病病原物分子鉴定方法及防治应用

说明书

本发明公开了一种乌头花叶病病原物分子鉴定方法及防治应用，采集表现出乌头花叶病症状的病样，截取病样的须根进行总RNA提取并去除基因组DNA；然后对所提取的总RNA进行逆转录，获取基因组cDNA；以获取的基因组cDNA为模板，以CMV cp‑F、CMV cp‑R为引物进行RT‑PCR扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；若电泳检测结果中出现376bp长度的条带，则初步表明该病样的病原物为CMV亚组II成员中的CMV‑FZ。若测序结果与SEQ.ID.NO.1所示的序列相一致，则确定该病样的病原物为CMV‑FZ。该病毒在乌头中是全株感染，叶片出现深绿色与浅绿色相间的花叶病状，有的品种叶片上还出现深绿色的环纹。在顶部幼嫩叶片上症状最明显。本发明的鉴定方法有利于乌头花叶病的防治。

技术领域

本发明属于植物病害防治技术领域，涉及一种乌头花叶病病原物分子鉴定方法及防治应用。

背景技术

中医药医疗和保健事业的不断发展，社会对药用植物的需求逐渐增多，人工栽培面积也逐年扩大，同时种植密度增加和其它耕作方式以及环境等因素的影响，导致病虫害问题日渐突出，一些中药材病害已成为严重影响生产的主要矛盾。附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx.的子根，其主要成分为乌头碱(aconitine)、次乌头碱(hypaconitine)和中乌头碱(mesaconitine)等具有抗炎、镇痛、强心、抗心律失常、降血糖及抗癌等药理作用，是一种重要的商品药材。

近几年，随着附子需求的增加，附子栽培面积逐年扩大，种植密度增加，使得附子病虫害种类繁多，病害逐年加重，加之长期单一的块根种植模式，加速了附子病虫害的传播和蔓延，使母代植株中的病毒代代相传，引起大面积的病毒爆发。乌头由于块根种植，导致各个产地的植株病害严重。乌头花叶病受害植株叶片变形、皱缩、卷曲，直至枯死；植株生长不良，地下块根畸形瘦小质地变劣。发生较高的年份或田块发病率最高可达70％～80％。

关于附子病害种类、病原物和发生发展规律有一些相关报道，唐丽等报道四川江油产区附子的主要病害有白绢病、霜霉病、根腐病、叶斑病、病毒病等，其中根腐病、白绢病、霜霉病对产量的影响较大，病毒病发生较为普遍，这几种病害往往相互交叉影响，严重时可造成50％以上的减产。块根大小的遗传差异性。花叶病，5-7月发生，为全株性病害，发病时在叶表面形成黄绿色相间的花斑，使叶片出现花叶症状，叶片变形、皱缩、卷曲，直至枯死；植株生长不良，地下块根畸形瘦小，质地变劣。对于病虫害有一定防治方法，然而对于乌头病毒病害的了解和研究匮乏。对于防治病毒病的工作不太充足。

黄瓜花叶病毒(CMV)是对经济上重要的植物病毒其中之一，黄瓜花叶病毒(CMV)分离株能感染500个属的1300多种植物超过100个家族。许多CMV毒株已被确定为诱发多种症状范围从轻度到严重发育不良和坏死的症状。病毒通过通过植物汁液机械地传播并且被80多种蚜虫传播传播。CMV的基因组含有3条正义单链RNA(RNA1、RNA2和RNA3，共编码5种蛋白(la、2a、2b、MP和CP)。基于血清学关系，序列数据和核酸杂交检测，CMV分离株是分为两个主要亚组(I和II)，进一步划分，将亚群I分为亚组IA和亚组IB。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种乌头花叶病病原物分子鉴定方法及防治应用，本发明采用RT-PCR对疑似病毒感染植株进行检测、鉴定，确定乌头被黄瓜花叶病毒侵染，为附子病毒病防治提供防治应用。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种乌头花叶病病原物分子鉴定方法，包括以下操作：

1)采集表现出乌头花叶病症状的病样，截取病样的须根进行总RNA提取并去除基因组DNA；然后对所提取的总RNA进行逆转录，获取基因组cDNA；

2)以获取的基因组cDNA为模板，以CMV cp-F、CMV cp-R为引物进行RT-PCR扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；