[发明专利]一种乌头花叶病病原物分子鉴定方法及防治应用

权利要求书

1.一种乌头花叶病病原物分子鉴定方法，其特征在于，包括以下操作：

1)采集表现出乌头花叶病症状的病样，截取病样的须根进行总RNA提取并去除基因组DNA；然后对所提取的总RNA进行逆转录，获取基因组cDNA；

2)以获取的基因组cDNA为模板，以CMV cp-F、CMV cp-R为引物进行RT-PCR扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；

所述的CMVcp-F：5’-ATGGACAAATCTGAATCAACCA-3’；

所述的CMVcp-R：5’-GACTGTCACCCACACGGTAGAAT-3’；

3)若电泳检测结果中出现376bp长度的条带，则初步表明该病样的病原物为CMV亚组II成员中的CMV-FZ。

2.如权利要求1所述的乌头花叶病病原物分子鉴定方法，其特征在于，获得琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物之后，对376bp的目的片段进行回收测序，若测序结果与SEQ.ID.NO.1所示的序列相一致，则确定该病样的病原物为CMV-FZ。

3.如权利要求1所述的乌头花叶病病原物分子鉴定方法，其特征在于，所述的总RNA提取是采用RNA prepPure提取试剂盒进行提取，采用DNaseI去除基因组DNA，运用反转录试剂盒进行逆转录；

逆转录反应程序：25℃变性10min，50℃保温45min，85℃保温5min。

4.如权利要求1所述的乌头花叶病病原物分子鉴定方法，其特征在于，所述的RT-PCR扩增中，RT-PCR扩增体系为：5μL 10×Easy Taq buffer(plus Mg²⁺)，1μL浓度为10mmol·L^-1的dNTP Mixture，0.5μL浓度为10μmol·L^-1的上游引物，0.5μL浓度为10μmol·L^-1的下游引物，1μL浓度为5U·μL^-1的Easy Taq，2μL cDNA模板，ddH2O补充至15μL；

扩增反应条件：95℃预变性5min；94℃变性30s，55.7℃退火30s；72℃延伸1min；35个循环；最后一轮循环后72℃延伸5min。

5.以CMV-FZ作为病原物防治对象在防治乌头花叶病中的应用。

6.以CMV-FZ作为病原物在制备防治乌头花叶病的药物中的应用。