[发明专利]一种手性3-氨基-1-丁醇的合成方法

权利要求书

1.一种(R)-3-氨基-1-丁醇的合成方法，包括如下步骤：

（A）以1，3-丁二醇为底物，经酶A及其辅酶催化反应生成3-酮-1-丁醇；

（B）以步骤（A）生成的3-酮-1-丁醇为底物，经酶B及其辅酶催化反应生成(R)-3-氨基-1-丁醇；

所述酶A为醇脱氢酶或所述醇脱氢酶的突变体；

所述酶B为如下（B1）-（B5）中任一转氨酶：

（B1）来源于土曲霉（Aspergillus terreus）的转氨酶，氨基酸序列为SEQ ID No.46；

（B2）来源于费希新萨托菌（Neosartorya fischeri）的转氨酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.48；

（B3）来源于分支杆菌（Mycobacterium vanbaalenii）的转氨酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.50；

（B4）来源于Arthrobacter sp. KNK168的转氨酶，氨基酸序列为SEQ ID No.52；

（B5）在（B1）-（B4）中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白；

所述醇脱氢酶为如下（a1）-（a20）中任一：

（a1）来源于短小乳杆菌（Lactobacillus brevis）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.2；

（a2）来源于高温厌氧杆菌（Thermoanaerobacter brockii）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ ID No.4；

（a3）来源于Lactobacillus kefiri DSM 20587的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.6；

（a4）来源于Thermoanaerobacter wiegelii Rt8.B1的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.8；

（a5）来源于酒球菌（Oenococcus alcoholitolerans）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQID No.10；

（a6）来源于致黑脱硫肠状菌（Desulfotomaculum nigrificans）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ ID No.12；

（a7）来源于一氧化碳嗜热窦菌（Thermosinus carboxydivorans）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ ID No.14；

（a8）来源于烷嗜热厌氧杆菌（Thermoanaerobacter mathranii）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ ID No.16；

（a9）来源于Firmicutes bacterium CAG:137的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.18；

（a10）来源于甲烷八叠球菌（Methanosarcina thermophila）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ ID No.20；

（a11）来源于拜氏梭菌（Clostridium beijerinckii）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQID No.22；

（a12）来源于未培养梭菌（uncultured Clostridium sp.）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ ID No.24；

（a13）来源于丝状孢子梭菌（Clostridium taeniosporum）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ ID No.26；

（a14）来源于脱硫肠状菌（Desulfotomaculum putei）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQID No.28；

（a15）来源于二醇梭菌（Clostridium diolis）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.30；

（a16）来源于匙形梭菌（Clostridium cochlearium）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.32；

（a17）来源于笃斯梭菌（Clostridium uliginosum）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.34；

（a18）来源于Clostridiales bacterium SK-Y3的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQ IDNo.36；

（a19）来源于近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis）的醇脱氢酶，氨基酸序列为SEQID No.38；

（a20）在（a1）-（a19）中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白；

所述醇脱氢酶的突变体为如下（c1）-（c5）：

（c1）与SEQ ID No.2所示来源于短小乳杆菌的醇脱氢酶相比，仅存在如下突变中的至少一种：I11V、G37D；

（c2）与SEQ ID No.4所示来源于高温厌氧杆菌的醇脱氢酶相比，仅存在如下突变：A85G/I86A或者A85G/I86A/ W110A或者A85G/I86A/ G198D；

（c3）与SEQ ID No.6所示来源于高加索酸奶乳杆菌的醇脱氢酶相比，仅存在如下突变：G37D；

（c4）与SEQ ID No.8所示来源于威吉利热厌氧杆菌的醇脱氢酶相比，仅存在如下突变：G198D；

（c5）在（c1）-（c4）中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。