[发明专利]一种分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法

说明书

本发明公开了一种分离制备矮牵牛素‑3‑O‑阿拉伯糖苷的方法，包括醇提浓缩、大孔树脂吸附、制备液相色谱纯化和高速逆流色谱分离，从花色苷组成复杂的蓝莓原料中分离制备矮牵牛素‑3‑O‑阿拉伯糖苷单体。本发明首次将制备液相色谱和高速逆流色谱技术结合，并通过对工艺参数的优化，从蓝莓中分离得到高纯度的矮牵牛素‑3‑O‑阿拉伯糖苷单体，其纯度高达99％。

技术领域

本发明涉及天然产物的分离纯化领域，具体涉及一种分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法。

背景技术

花色苷是广泛存在于植物中的一种水溶性色素，是由花青素与一个或多个糖基，如葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等，通过糖苷键结合形成的多酚类化合物。自然界中常见的花青素主要有6种，分别是天竺葵素(Pelargonidin)、矢车菊素(Cyaniain)、飞燕草素(Delphinidin)，芍药素(Peonidin)，矮牵牛素(Petunidin)和锦葵色素(Malvidin)。近年来，大量的研究证实天然来源的花色苷具有抗氧化、抗肿瘤、预防心血管疾病、缓解糖尿病及控制肥胖等生物活性。随着人们生活水平的不断提高，人们对天然来源且无毒副作用的功能组分的呼声也越来越高，花色苷作为天然来源最具代表性的功能因子，因其良好的着色功能及优良的生物活性受到广大研究者及食品医药企业的青睐。

但由于花色苷类化合物结构相似，极性差异较小，导致高纯度花色苷单体的分离纯化极其困难。但目前，已经有报道分离纯化得到高纯度花色苷单体。

如公开号为CN 106366141 A的中国专利文献公开了一种分离制备天竺葵素-3-O-葡萄糖苷单体的方法，以草莓为原料，通过冷冻干燥、醇提浓缩、分级萃取、AB-8大孔树脂纯化制备得到。又如公开号为CN 106831911 A的中国专利文献公开了一种从蓬蘽中分离纯化天竺葵素-3-O-葡萄糖苷单体的方法，包括醇提浓缩、乙酸乙酯萃取、AB-8大孔树脂及高速逆流色谱。

上述技术方案中虽然均制备得到了高纯度的花色苷单体，但主要原因在于草莓和蓬蘽中花色苷组成简单，仅含矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷和天竺葵素-3-O-芸香糖苷的3种花色苷化合物，其中天竺葵素-3-O-葡萄糖苷占总花色苷含量的80％以上。但对于花色苷组成复杂的原料，上述的技术方案则难以实现高纯度花色苷单体的纯化与制备。

蓝莓，又称越橘、蓝浆果，属杜鹃花科，越橘属植物，不仅富含人体所需的基础营养成分，而且还富含多种不同种类的花色苷，具有活化视网膜、降血糖、抗炎和抗肿瘤作用。我国的蓝莓栽培起步较晚，目前主要以直接鲜食消费为主，或加工成果酱、果汁、果酒等初级产品，有关高附加值的蓝莓产品在国内外市场上却寥寥无几。由于蓝莓中的花色苷组成复杂，含有至少12种结构相似的花色苷化合物，导致目前通过单一的柱层析或色谱技术制备得到的高纯度花色苷均为花色苷混合物，而非高纯度花色苷单体。

如公开号为CN 106905391 A的中国专利文献中公开了一种蓝莓花色苷提取、分离纯化方法，将蓝莓榨汁与提取剂混合，在常温、压力为100～160MPa的条件下均质提取1～4次，过滤、合并滤液，得到蓝莓花色苷粗提物，再经HPD600大孔树脂进行分离纯化。该技术方案以pH＝1～2的80％乙醇溶液为提取剂，利用高压将蓝莓功效成分从生物细胞中释放，解决了蓝莓有效成分在保持高提取率的前提下，有效成分不被高温破坏的问题，但获得的提取物为花色苷混合物，而花色苷的含量仅为46.45％。

又如公开号为CN 104109403 A的中国专利文献中公开了一种野生蓝莓花青素提取、纯化新方法，制备工艺包括：生物酶解、微波回流提取、收集、粗过滤、微孔过滤、超滤、真空冷冻干燥、分相、高速逆流色谱纯化。该技术方案采用非热力高效提取分离技术，提高了萃取速度，但提取、纯化工艺过于复杂，难以实现大规模的工业化生产，且获得的提取物仍为花色苷混合物，花色苷的纯度最高仅为42.7％。