[发明专利]一种分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法

权利要求书

1.一种分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法，其特征在于，包括：

(1)醇提浓缩：以蓝莓为原料，经醇提浓缩得到蓝莓花色苷粗提液；

(2)大孔树脂吸附：将所述蓝莓花色苷粗提液注入大孔树脂，经洗脱及后处理得到蓝莓花色苷提取物冻干粉；

(3)制备液相色谱纯化：

先将所述蓝莓花色苷提取物冻干粉经去离子水复溶后，再注入制备液相色谱仪中进行纯化，所述复溶后的浓度为50～120mg/mL，进样量为1～4mL；

采用C18色谱柱，经流动相进行梯度洗脱，再经后处理得到矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷粗品冻干粉；所述C18色谱柱的规格为20mm×250mm，温度为25～30℃；

所述流动相：A相为纯甲醇，B相为甲酸体积百分浓度为3～4％的甲酸-水体系，流动相的流速为5～10mL/min；

所述梯度洗脱的程序为：A相的体积百分浓度在0～5min内保持5％不变，在5～30min内从5％上升至60％，收集20～21min的洗脱物；

(4)高速逆流色谱分离：

以正丁醇-甲基叔丁基醚-甲醇-水-三氟乙酸为两相溶剂体系，配制所述两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，以20～30mL/min的流速将所述固定相泵入高速逆流色谱仪中，在25～35℃、主机转速为850～910r/min的条件下，以3～4mL/min的流速泵入所述流动相，待两相达到平衡后，将所述矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷粗品冻干粉用流动相溶解后进样，经液相检测后，收集仅包含目标产物的流出液，再经减压浓缩、冷冻干燥后得到矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷单体；

所述矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷粗品冻干粉用流动相溶解后的浓度为10～30mg/mL，进样体积为1～15mL；

所述液相检测的波长为280nm；

所述正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的体积比为2：2：1：5：0.01～0.1。

2.根据权利要求1所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述醇提浓缩，具体为：

将洗净的蓝莓与酸性乙醇溶液混合，超声提取完全后过滤并收集滤液，滤液在40～50℃下真空旋转蒸发除去乙醇并浓缩，得到蓝莓花色苷粗提液；

所述酸性乙醇溶液为酸的体积百分浓度为0.1～1.5％的乙醇溶液；

所述蓝莓与酸性乙醇溶液的质量体积比为1：5～12g/mL。

3.根据权利要求2所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法，其特征在于，所述酸选自盐酸、甲酸、乙酸、草酸中的至少一种；

所述乙醇溶液的体积百分浓度为50～95％。

4.根据权利要求1所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述大孔树脂吸附，具体为：

将所述蓝莓花色苷粗提液注入大孔树脂中，先用去离子水冲洗大孔树脂，再用体积百分浓度为2～22％的酸性醇溶液进行梯度洗脱，收集体积百分浓度为14～18％的酸性醇溶液的洗脱液，40～50℃下真空旋转蒸发除醇后，真空冷冻干燥得到蓝莓花色苷提取物冻干粉；

所述大孔树脂的牌号选自AB-8、HPD-100、D101或DM-130；

所述酸性醇溶液选自酸的体积百分浓度为0.1～1.5％的醇溶液，醇溶液选自甲醇溶液或乙醇溶液，酸选自盐酸、甲酸、乙酸中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的后处理包括减压浓缩和真空冷冻干燥。

6.根据权利要求5所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法，其特征在于，所述两相溶剂系统中，正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的体积比为2：2：1：5：0.01。