[发明专利]猪细小病毒VLPs抗体检测试剂盒及其制备方法、应用

说明书

本发明公开了猪细小病毒VLPs抗体检测试剂盒及其制备方法、应用，其检测试剂盒包括预包被猪细小病毒VLPs的酶标板、封闭液、样品稀释液、酶结合物、浓缩洗涤液、酶底物溶液和终止液。本发明是首次采用猪细小病毒的病毒样颗粒作为包被抗原，建立了可检测猪细小病毒的试剂盒，还试剂盒可对血清中的猪细小病毒的抗体水平进行快速检测；本发明试剂盒检测敏感性高、特异性和可重复性好，结果稳定。同时所采用的病毒样颗粒对操作者和环境安全无害、无传染性。另外本发明试剂盒应用大肠杆菌表达系统开发，因而具有经济、廉价的优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种猪细小病毒VLPs ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法、应用。

背景技术

猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)是一种耐受性极强且具有高度传染性的病毒，是导致母猪繁殖障碍的病原之一，猪细小病毒病的临床主要特征是妊娠母猪流产、胎儿死亡和木乃伊化。该病与断奶仔猪多系统衰弱综合征以及猪渗出性皮炎等疾病有关，易感成年猪如果在交配期间或者妊娠期间暴露在PPV存在的环境中，该病毒会很容易穿过胎盘屏障感染胚胎和胎儿。调查发现该病呈全球性分布，特别对妊娠母猪和仔猪危害较大，阻碍了猪养殖产业化进程，经济损失巨大。所以对于PPV的预防、诊断就显得尤为重要。

病毒样颗粒(VLPs)是由病毒的衣壳蛋白形成的空心颗粒，具有和天然病毒粒子相同或相似的形态，但不含病毒遗传物质，不能自主复制，因此不会产生任何可能导致感染的遗传成分。并且衣壳蛋白组装成VLPs时，通过各亚单位之间的相互作用可以形成单个蛋白不具有的立体构象，而且可以重复并高密度的展示抗原位点。因此相对于单个病毒蛋白，使用VLPs对血清抗体检测具有更强的免疫原性和更高特异性。VLPs的天然生物学结构类似于亲本病毒颗粒，可以近乎完美的展示诱导中和抗体的抗原表位，因此免疫性强，不但能激发体液免疫反应，还可以激发细胞和粘膜免疫。VLPs具备安全、高效的特点，是未来具有广阔发展前景的候选疫苗或传递抗原的载体。

目前PPV的诊断方法主要有免疫过氧化酶单层细胞实验(IPMA)、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA以及竞争ELISA等，但由于IPMA和IFA要求比较高，不适合大规模的PPV抗体检测。目前用于检测PPV抗体的ELISA方法大多是以灭活病毒、重组病毒、单个蛋白或多肽等作为抗原，但是以完整病毒粒子作为抗原存在安全风险，单个蛋白或多肽的免疫原性相对较差。

因此，现有技术有待于进一步发展。

发明内容

本发明申请的目的在于解决现有技术的缺陷和不足，提供一种特异性强、敏感性高、稳定性好的用于猪细小病毒VLPs ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法、应用。

为实现上述发明目的，本发明提供一种猪细小病毒VLPs ELISA抗体检测试剂盒，其中，包括预包被猪细小病毒VLPs的酶标板、封闭液、样品稀释液、酶结合物、浓缩洗涤液、酶底物溶液和终止液。

所述的猪细小病毒VLPs ELISA抗体检测试剂盒，其中，所述猪细小病毒VLPs通过以下步骤制得：

1)对猪细小病毒毒株结构蛋白VP2基因序列进行密码子优化合成，并基于优化后基因序列制备pUC-VP2重组质粒；

2)利用pUC-VP2重组质粒和pSMK载体质粒构建重组质粒pSMK-VP2；

3)将重组质粒pSMK-VP2转化大肠杆菌并诱导表达得到VLPs。

所述的猪细小病毒VLPs ELISA抗体检测试剂盒，其中，猪细小病毒毒株结构蛋白VP2基因序列进行密码子优化合成，合成后核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的猪细小病毒VLPs ELISA抗体检测试剂盒，其中，利用pUC-VP2重组质粒和pSMK载体质粒构建重组质粒pSMK-VP2具体为：