[发明专利]一种快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组及试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组及试剂盒，本发明属于动物病毒学和分子生物学技术领域。该试剂盒包括SEQ ID1~6所示的引物序列，还包括了2×F8 Fastlong PCR MasterMix、cDNA模板和灭菌水。本发明提供的PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测试剂盒采用多重PCR扩增，三种病变相似且同为DNA病毒的病毒一次检测，检测总时间控制在2小时左右，其检测方法易于操作、方便快捷，能达到快速检测的目的。

技术领域

本发明属于动物病毒学和分子生物学技术领域，具体为针对猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型一步法三重PCR的检测引物组、检测试剂盒及应用。

背景技术

猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）为一种共价闭合、单股环状DNA病毒，是迄今发现最小动物病毒。2015年前，全球范围内仅发现PCV1和PCV2两个基因型。其中，PCV1被认为是猪肾细胞PK-15污染物，但不产生细胞病变效应，对猪无致病性。PCV2能引起猪圆环病毒相关疾病（PCVAD），主要有断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎和肾病综合征（PDNS）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、繁殖障碍、增生性坏死性肺炎（PNP）和肠炎等。临床上PCV2常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪肺炎支原体(M. hyo)等病原体混合感染。同时，感染PCV2后还容易继发细菌感染，给养猪业造成巨大经济损失。近年来PCV2流行毒株由PCV2a向PCV2b，继而向PCV2d的转变，病毒的致病力逐渐变强，对养猪业的危害加重。

2015年6月，美国北卡罗来纳州某商品化猪场暴发PDNS疫情。患病母猪厌食、皮肤呈现多灶性丘疹、斑点和浅表性皮炎，所产胎儿(包括弱胎、死胎、木乃伊胎)具有相似临床症状。Palinski等借助新一代测序(NGS)技术，从患病母猪及流产胎儿体内首次鉴定出一种新病毒，该病毒与圆环病毒科病毒具有类似基因组结构和遗传相似性，但与其他圆环病毒衣壳蛋自氨基酸序列同源性低于70%，根据国际病毒分类委员会(ICTV)圆环病毒分类标准圈，将其归类为一种新型圆环病毒，命名为PCV3。作为新动物病原体，PCV3对猪致病性和在PCVAD中作用以及现有商品化PCV2疫苗对其免疫效果等有待进一步研究。目前已有PCV3在美国、韩国、巴西、意大利、波兰以及中国的华南、华中和华北多省市流行。

自20世纪90年代以来，PCV2便一直威胁着养猪业的发展，且近年来PCV2逐渐呈现出多亚型共同流行的趋势，使PCV2防控更加困难。同时，PCV3的出现使猪圆环病毒病更加复杂化。PCV1虽然不产生病变,但广泛存在于猪体内及猪的传代细胞中，其存在可能会影响PCV2和PCV3的增殖及致病性。因此，研究建立一种特异、快速的PCV1/2/3多重PCR检测方法，了解PCV1/2/3的流行情况，从而有效防控猪圆环病毒病的发生与流行，具有重要现实意义。

发明内容

本发明的目的是解决上述技术问题，提供一种快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组及试剂盒，该试剂盒能够快速区分PCV1、PCV2和PCV3，灵敏感高、特异性强，从而有效防控猪圆环病毒病的发生和流行。为实现本发明目的所使用的技术方案为：

一种快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组，所述多重PCR检测引物组包括PCV1检测引物组、PCV2检测引物组和PCV3检测引物组；

所述PCV1检测引物组由具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ IDNO:2 所示核苷酸序列的下游引物组成；

所述PCV2检测引物组由具有SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ IDNO:4 所示核苷酸序列的下游引物组成；

所述PCV3检测引物组由具有SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ IDNO:6 所示核苷酸序列的下游引物组成。