[发明专利]一种快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组及试剂盒在审
| 申请号： | 201810493756.2 | 申请日： | 2018-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN108796124A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 秦毅斌;卢冰霞;赵武;刘磊;何颖;陈忠伟;段群棚;周英宁;李斌;梁家幸;苏乾莲;闭炳芬;蒋冬福;卢敬专;李茂宁;侯韶毅 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州市红荔专利代理有限公司 44214 | 代理人： | 李彦孚;何承鑫 |
| 地址： | 530001 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 多重PCR检测 引物组 分子生物学技术 多重PCR扩增 动物病毒学 快速检测 时间控制 一次检测 引物序列 灭菌水 检测 病变 病毒 | ||
1.一种快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组，其特征在于，所述多重PCR检测引物组包括PCV1检测引物组、PCV2检测引物组和PCV3检测引物组；
所述PCV1检测引物组由具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ IDNO:2 所示核苷酸序列的下游引物组成；
所述PCV2检测引物组由具有SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ IDNO:4 所示核苷酸序列的下游引物组成；
所述PCV3检测引物组由具有SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ IDNO:6 所示核苷酸序列的下游引物组成。
2.根据权利要求1所述快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组，其特征在于，所述PCV1检测引物组是依据PCV1的全基因保守区域进行设计，扩增的目的片段大小为409bp；所述PCV2检测引物组是依据PCV2的全基因保守区域进行设计，扩增的目的片段大小为1173 bp；所述PCV3检测引物组是依据PCV3的全基因保守区域进行设计，扩增的目的片段大小为669 bp。
3.根据权利要求1所述快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组，其特征在于，所述多重PCR检测引物组的退火温度为56.1℃。
4.根据权利要求1所述快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测引物组，其特征在于，所述多重PCR检测引物组在制备猪圆环病毒分型检测试剂盒的应用。
5.一种如权利要求1所述快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，包括具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的上游引物以及具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4 和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的下游引物。
6.根据权利要求5所述快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括2×F8 Fastlong PCR MasterMix、cDNA模板和灭菌水。
7.根据权利要求5或6所述快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的多重PCR检测试剂盒中PCR反应条件为：94℃预变性2 min；94℃变性10 s，56.1℃复性10 s，72℃延伸10 s，30个循环；最后72℃延伸3 min。
8.根据权利要求5或6所述快速区分PCV1、PCV2和PCV3的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述PCR检测试剂盒的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3 、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:6所示引物使用浓度为25 μmol/L。
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