[发明专利]一种DNA的文库定量及测序方法

说明书

本申请公开一种DNA的文库定量及测序方法，包括：步骤一：做处理表单、样本和试剂耗材准备；步骤二：准备1.5ml低吸附管,加入499uINF水,核对编号及NF水量；融化的样本振荡混合均匀,瞬离至管底,加1uL样本至499uLNF水中,核对管号,振荡混匀稀释完的样本,瞬时离心；在冰盒上配MIX,并分装18uLMIX到放置在金属冰盒上的0.2mlPCR板中；核对好编号,吸取2uL样本到18ulMIX中；封好膜后离心PCR仪中进行检测；步骤三：根据所述步骤二中的定量检测结果,制作上机表单,进行乳液PCR；步骤四：OT下机处理；步骤六：进行上机测序；操作简单便利并且灵活、降低测序成本，减少测序流程，提高劳动效率，流程科学，标准明确，实践操作效果好。

技术领域

本发明属于基因检测领域，具体是指一种DNA的文库定量及测序方法。

背景技术

生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。 第一代测序仪对电泳分离技术的依赖，使其难以进一步提高分析的速度和并 行化程度，也难以通过微型化降低测序成本。经过不断的技术开发和改进， 21世纪初，以Roche454技术、illumina公司的GenomeAnalyzer技术和ABI 公司的Solid技术为标记的第二代测序技术诞生了。第二代技术大大降低了 测序成本，还大幅度提高了测序速度并保持了高准确性。其中，illumina公 司的第一台测序仪于2006年问世，之后开发出来一系列的测序仪，如Hiseq2000、Hiseq2500、Miseq、HiseqX等，在准确性、通量、成本和速度方 面表现更优秀，而使其成为全球使用量最大的第二代测序仪。在第二代测序 平台不断完善的同时，以对单分子DNA进行非PCR测序为主要特征的第三 代测序技术也初显端倪。但由于其关键技术问题尚待解决，目前还未得到广 泛应用。

近几年来，包括人、拟南芥以及水稻等越来越多的基因组被测序，全基 因组测序为重要基因的克隆、基因的系统进化和基因组学研究提供了坚实的 平台。但依然有部分珍贵物种由于样本较少获取难度大，或者个体较小获得 的基因组浓度较低等原因，得到的基因组DNA少(低于50ng)，按照目前现 有的文库定量及测序方法，准确检测的难度非常大。

按照目前现有的文库定量及测序方法，测定难度大、不准确合理。

因此，如何研发一种DNA的文库定量及测序方法，能够解决上述问题， 便成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本申请解决的主要问题是提供一种DNA的文库定量及测序方法，操作 简单、流程科学，标准明确，实践操作效果好，以解决一种DNA的文库定 量及测序方法成本高、流程不科学，标准不明确，实践操作效果不佳、操作 难度高、难以复制操作的技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种DNA的文库定量及测序方 法，其特征在于，包括：

步骤一：做处理表单、样本和试剂耗材准备；

步骤二：根据定量表找出对应的样本,按顺序排列；准备1.5ml低吸附管, 加入499uINF水,核对编号及NF水量；融化的样本振荡混合均匀,瞬离至管底, 加1uL样本至499uLNF水中,核对管号,振荡混匀稀释完的样本,瞬时离心；在 冰盒上配MIX,并分装18uLMIX到放置在金属冰盒上的0.2mlPCR板中；核 对好编号,吸取2uL样本到18ulMIX中；封好膜后离心2min,放入荧光定量 PCR仪中进行检测；