[发明专利]一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法

说明书

本发明提供了一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法，其中所述制备方法包括：取无抗体血清，并将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基。本发明所提供的制备方法实现了杂交瘤细胞培养基在培养杂交瘤细胞时免驯化流程，提高了细胞培养效率，大大减少了由于添加高比例血清对于工艺稳定性的影响，避免了外源抗体的干扰，培养方法简单、有效，细胞培养效果好，抗体表达量高，为细胞培养的研发人员带来了极大的方便。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法。

背景技术

单克隆抗体具有广泛的应用，可用于疾病的诊断和治疗等。目前用于诊断的单克隆抗体主要来源于腹水法或细胞培养方法，所用细胞主要为杂交瘤细胞。由于腹水法获得的产品批间差异较大，并且涉及到动物伦理，将会逐渐被细胞培养的方法所取代。

杂交瘤细胞由B细胞和骨髓瘤细胞融合所得，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。在体外培养杂交瘤细胞即可获得单克隆抗体。该技术在诊断试剂开发、新药开发中具有重要作用。

由于杂交瘤细胞来源广泛，并且非常难于进行无血清培养，从而导致目前针对杂交瘤细胞培养的无血清培养基培养效果较差，工艺难以稳定，从而可能会导致抗体批间差异较大。商业化培养基主要分为完全培养基和不完全培养基，完全培养基自身价格昂贵，且往往需要较长时间的驯化才能培养杂交瘤细胞，且培养效果也比较差，不完全培养基如果不加入血清的话将无法培养杂交瘤细胞，但如果在培养基中加入血清又会引入外源抗体的干扰，影响产品的品质。所以具有能够稳定、快速、高效的培养杂交瘤细胞的培养基显得至关重要。

总之，现有的杂交瘤细胞培养的无血清培养基在培养杂交瘤细胞前需要长时间的驯化，并且获得的抗体表达量比较低。对于一些特殊杂交瘤细胞，比如羊杂交瘤细胞，即使驯化也不能对其进行有效培养表达。如果使用不完全培养基培养杂交瘤细胞，需要加较高的血清，高比例的血清会对工艺的稳定性造成不良影响，并且会带来外源抗体的干扰，影响产品的品质。

发明内容

本发明提供一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法，以解决现有的技术中的不足。

为解决上述问题，本发明提供一种杂交瘤细胞培养基的制备方法，包括：

取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清；

配制无血清培养基和水解物溶液；

将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基。

优选地，所述“取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清”，包括：

将实验血清通过亲和层析柱去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液；

将所述流穿液进行经0.1-0.45μm滤膜过滤，得到无抗体血清。

优选地，所述“将实验血清通过亲和层析去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液”之前，还包括：

将实验血清在25-37℃条件下进行解冻，解冻后经过0.1-0.45μm滤膜过滤，得到过滤血清；

将所述过滤血清在2-8℃条件下冷却30-60分钟。

优选地，

所述亲和层析柱包括Protein A和Protein G中的一种；

所述实验血清包括胎牛血清和新生牛血清中的一种。

5.如权利要求1所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，

所述无血清培养基包括完全培养基和不完全培养基中的一种或两种；