[发明专利]一种适用于生物样本的SEM检测样品制备试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了适用于生物样本的SEM检测样品制备试剂盒及其应用，该试剂盒包括有多孔板，多孔板的孔内设置有多聚赖氨酸修饰的硅片，及处理样本的试剂等。将该试剂盒用于生物样本的SEM检测，主要有以下步骤：将生物样本溶液滴加在多孔板内的多聚赖氨酸修饰的硅片上；去除多余的生物样本溶液；然后用缓冲液孵育，再用磷钨酸处理后，并经含六甲基二硅氮烷的乙醇处理干燥，获得SEM检测样品，并进行SEM检测。该试剂盒可用于生物样本的SEM检测使用，具有实验结果重复性好，分析结果准确性高等优点。

技术领域

本发明属于检测试剂盒领域，具体是指一种适用于外泌体，细胞，细菌，病毒或生物组织等生物样本进行SEM(扫描电子显微镜)检测用的检测样品制备制剂盒及其应用。

背景技术

扫描电子显微镜(SEM)是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观形貌观察工具，主要是利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态，即用极狭窄的电子束去扫描样品，通过电子束与样品的相互作用产生各种效应，其中主要是样品的二次电子发射效应，基于二次电子能够产生样品表面放大的形貌像，这个像是在样品被扫描时按时序建立起来的，即使用逐点成像的方法获得放大像。

现有技术中，很多生物样本(例如外泌体，细胞，细菌，病毒或生物组织)不能很好的直接用扫描电子显微镜或原子力显微镜观察，需要对生物样本进行处理，让生物样本能够匹配SEM，才能观察分析。已有的可以利用喷金等手段，对生物样本表面喷镀金属，使得生物样本表面具有导电性，更好的观察。然而，喷镀金属可能导致生物样本细微结构的损失，喷镀不均匀也可能导致是实验结果重复性差，分析结果出现偏差。因此有必要对此进行改进。

发明内容

本发明实施例所要解决的技术问题在于，提供一种适用于生物样本检测的SEM样品试剂盒。通过该试剂盒对生物样本进行处理成检测样品，可以保持生物样本的原结构形态，而且检测实验结果一致性好。

为实现上述目的，本发明的技术方案是该试剂盒包括有多孔板，多孔板的孔内设置有多聚赖氨酸修饰的硅片及SEM检测试剂。

SEM检测试剂包括有PBS缓冲液、戊二醛、PFA多聚甲醛、磷钨酸水溶液、六甲基二硅氮烷和乙醇。

本发明提供了一种基于所述的SEM样品试剂盒的SEM检测方法，包括有以下步骤：

1)将多聚赖氨酸修饰的硅片置于多孔板的一个孔中；

2)将待测生物样本溶液滴加在多孔板内的的多聚赖氨酸修饰的硅片上，孵育；

3)除多余的生物样本溶液；

4)加入1X PBS缓冲液，并在1X PBS缓冲液中添加2wt％戊二醛、4wt％PFA多聚甲醛，4℃孵育30min-16h；

5)用1X PBS缓冲液清洗；

6)加入0.1-1％磷钨酸处理；

7)超纯水清洗；

8)再依次用30％、50％、70％、90％的乙醇处理5min；

9)100％乙醇处理5min，重复2次；

10)含50％体积比六甲基二硅氮烷的乙醇处理15-30s；

11)100％六甲基二硅氮烷处理15-30s；

12)去除六甲基二硅氮烷；

13)置于在真空干燥器中干燥；

14)然后将经上述步骤处理后的多聚赖氨酸修饰的硅片置于SEM上检测。

进一步设置是所述的待测生物样本溶液为含有外泌体，细胞，细菌，病毒或生物组织的生理缓冲溶液。

本发明的优点是：