[发明专利]猪大肠杆菌菌影的制备及其免疫效力分析在审
| 申请号： | 201810375116.1 | 申请日： | 2018-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN108310373A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 倪宏波;翟军军;张晓轩;闻晓波;周玉龙 | 申请（专利权）人： | 黑龙江八一农垦大学 |
| 主分类号： | A61K39/108 | 分类号： | A61K39/108;A61P31/04;G01N33/569;C12N15/70 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 许伯严 |
| 地址： | 163319 黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 菌影 大肠杆菌 制备 免疫效力 疫苗 特异性细胞免疫 产肠毒素 体液免疫 稳定遗传 新型疫苗 新型佐剂 小鼠 种猪 佐剂 分析 激发 试验 探索 成功 发现 开发 研究 | ||
【权利要求书】：
1.一种猪大肠杆菌菌影疫苗的制备方法，其特征在于：菌液置42℃诱导后，离心收集沉淀后，用灭菌的PBS溶液重悬菌影沉淀。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将重悬的菌影沉淀，离心弃上清后，将菌体沉淀用灭菌后的PBS溶液稀释到5×109CFU/mL。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将重悬的菌体沉淀，离心弃上清后，将菌体沉淀用灭菌后的PBS溶液稀释到1×1010CFU/mL，加入0.3％体积的甲醛，37℃恒温箱中灭活。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：将灭活后的疫苗与等体积的206佐剂混合均匀。
5.一种猪大肠杆菌菌影疫苗的免疫效力分析方法，其特征在于，所述方法具有如下步骤：将25g的雌性昆明系小鼠，间隔14天连续免疫两次，一免后每隔一周对小鼠进行唾液、粪便和血清的样品收集，利用间接ELISA方法对唾液和粪便样品进行sIgA的检测；利用间接ELISA方法对血清样品进行IgG检测；初免两周和二免两周后取脾脏分离淋巴细胞，用流式细胞仪来检测脾脏中CD8+和CD4+细胞动态变化，对小鼠腹腔进行攻毒保护试验，以及对小鼠特异性抗体的持续期进行检测。
6.如权利要求1所述的猪大肠杆菌菌影疫苗在预防猪产肠毒素性大肠杆菌的应用。
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