[发明专利]一种鉴定四种葡萄物种的方法及其专用试剂盒

说明书

本发明公开了一种鉴定四种葡萄物种的方法及其专用试剂盒。该方法为根据待测葡萄的基因组DNA中8个SNP位点的基因型，区分待测葡萄属于酿酒葡萄、华东葡萄、毛葡萄还是山葡萄。8个SNP位点依次见序列表中序列1自5’末端起的第2405位、第2449位、第2450位、第2484位、第2492位、第2511位、第2555位和第2563位。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鉴定四种葡萄物种的方法及其专用试剂盒。

背景技术

葡萄科(vitaceae)是16个属和700余个种构成的双子叶植物(2n＝38)，主要在热带和温带地区生长，葡萄属(Vitis)作为葡萄科中典型属之一，有60多种，主要分布在东亚、北美以及欧洲至中亚。葡萄属植物大部分野生种可酿酒食用，含有白藜芦醇、黄酮类、多酚等，具有利尿，清血等作用。

葡萄属植物主要采用扦插和压条的方式进行无性繁殖，引种种植现象常有发生，命名重复或同名异物等现象十分普遍，这导致葡萄属植物种类数目不清、种名混乱且无标准化的分类方法等问题的出现。此外，葡萄属植物种内变异较大，加上种间的自然杂交及全球性的引种繁殖，使得葡萄属植物的种间鉴定十分困难。葡萄属植物种质资源鉴定具有很高的实用价值，对培育高抗性品种以及提高经济型葡萄产量具有重要意义。传统基于植物形态学的鉴别方法，极易受环境及人为因素的干扰。DNA分子标记作为一种高效的分子标记，可以快速简便进行种质资源的鉴定且发展迅速。目前葡萄属的植物已经展开少量分子标记的研究，例如RAPD、SRAP、SCAR、SSR及ISSR等，但这几种分子标记多态性较低、精确度较差且开发数量较少，能够用于葡萄属植物种质资源鉴定且具有高效稳定的SNP分子标记罕见报道。

DNA保守序列指的是具有高度相似性或一致性的DNA和RNA序列，这些序列虽然极其相似，但是它们却来自不同的物种或不同分子。保守序列的存在表明在物种进化过程中，有一段特殊的基因序列被保留了下来。其中16S和23S核糖体RNA被认为是最保守的片段，而基因编码区的保守片段进化速度适中，一个较小的基因片段就包含着从种内到种间、属间甚至科间的进化遗传信息，被认为是解决分类及系统进化问题可信的分子标记之一，目前在遗传育种、分子标记、物种进化等很多领域已经得到广泛应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何区分酿酒葡萄、华东葡萄、毛葡萄和山葡萄。

为解决上述技术问题，本发明首先保护与鉴定葡萄物种相关的SNP位点组合，可包括SNP1和/或SNP2和/或SNP3和/或SNP4和/或SNP5和/或SNP6和/或SNP7和/或SNP8；

所述SNP1为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2405位核苷酸；

所述SNP2为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2449位核苷酸；

所述SNP3为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2450位核苷酸；

所述SNP4为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2484位核苷酸；

所述SNP5为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2492位核苷酸；

所述SNP6为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2511位核苷酸；

所述SNP7为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2555位核苷酸；

所述SNP8为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2563位核苷酸。

上述SNP位点组合具体可由所述SNP1、所述SNP2、所述SNP3、所述SNP4、所述SNP5、所述SNP6、所述SNP7和所述SNP8组成。