[发明专利]一种鉴定四种葡萄物种的方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.成套引物，包括引物对33和/或引物对45和/或引物对46；

所述引物对33由引物33-F和引物33-R组成；

所述引物33-F为序列表的序列2所示的单链DNA分子；

所述引物33-R为序列表的序列3所示的单链DNA分子；

所述引物对45由引物45-F和引物45-R组成；

所述引物45-F为序列表的序列4所示的单链DNA分子；

所述引物45-R为序列表的序列5所示的单链DNA分子；

所述引物对46由引物46-F和引物46-R组成；

所述引物46-F为序列表的序列6所示的单链DNA分子；

所述引物46-R为序列表的序列7所示的单链DNA分子。

2.权利要求1所述成套引物的应用，为a1)或a2)或a3)或a4)：

a1)制备用于鉴定葡萄物种的试剂盒；

a2)制备用于鉴定待测样本是否来源于葡萄物种的试剂盒；

a3)鉴定葡萄物种；

a4)鉴定待测样本是否来源于葡萄物种；

所述葡萄物种为酿酒葡萄、华东葡萄、毛葡萄或山葡萄。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述待测样本为叶片。

4.含有权利要求1所述成套引物的试剂盒。

5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。

6.权利要求4所述试剂盒的应用，为a3)或a4)：

a3)鉴定葡萄物种；

a4)鉴定待测样本是否来源于葡萄物种；

所述葡萄物种为酿酒葡萄、华东葡萄、毛葡萄或山葡萄。

7.一种鉴定葡萄物种的方法，包括如下步骤：

(1)检测待测葡萄的基因组DNA中在SNP位点组合的基因型；所述SNP位点组合由SNP1、SNP2、SNP3、SNP4、SNP5、SNP6、SNP7和SNP8组成；

所述SNP1为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2405位核苷酸；

所述SNP2为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2449位核苷酸；

所述SNP3为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2450位核苷酸；

所述SNP4为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2484位核苷酸；

所述SNP5为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2492位核苷酸；

所述SNP6为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2511位核苷酸；

所述SNP7为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2555位核苷酸；

所述SNP8为葡萄基因组中序列表中序列1自5’末端起第2563位核苷酸；

(2)然后进行如下判断：

(r-1)如果待测葡萄的基因组DNA在所述SNP1为AA纯合型、所述SNP2为TG杂合型、所述SNP3为AA纯合型、所述SNP4为TG杂合型、所述SNP5为CC纯合型、所述SNP6为AG杂合型、所述SNP7为CT杂合型和所述SNP8为AA纯合型，则待测葡萄为酿酒葡萄；

(r-2)如果待测葡萄的基因组DNA在所述SNP1为AA纯合型、所述SNP2为TG杂合型、所述SNP3为AA纯合型、所述SNP4为GG纯合型、所述SNP5为CC纯合型、所述SNP6 为AG杂合型、所述SNP7为CC纯合型和所述SNP8为AA纯合型，则待测葡萄为华东葡萄；

(r-3)如果待测葡萄的基因组DNA在所述SNP1为GG纯合型、所述SNP2上的碱基缺失、所述SNP3上的碱基缺失、所述SNP4为GG纯合型、所述SNP5为TT纯合型、所述SNP6为AA纯合型、所述SNP7为CC纯合型和所述SNP8为AA纯合型，则待测葡萄为毛葡萄；

(r-4)如果待测葡萄的基因组DNA在所述SNP1为AG杂合型、所述SNP2为GG纯合型、所述SNP3为AA纯合型、所述SNP4为AG杂合型、所述SNP5为CT杂合型、所述SNP6为AA纯合型、所述SNP7为CC纯合型和所述SNP8为AG杂合型，则待测葡萄为山葡萄；

(r-5)如果待测葡萄的基因组DNA中不满足上述(r-1)、(r-2)、(r-3)和(r-4)中的任何一种情况，则待测葡萄不为酿酒葡萄、华东葡萄、毛葡萄或山葡萄。