[发明专利]一种从油茶籽中制备黄酮苷的方法

说明书

本发明公开一种从油茶籽中制备黄酮苷的方法，由以下步骤组成：将油茶籽脱脂，利用微生物发酵技术对油茶籽进一步处理，将处理后的油茶籽用醇水溶液提取后过滤，滤液浓缩至无醇，使用极性溶剂对滤液萃取，收集到的水液层用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层浓缩烘干，得到黄酮苷提取物。本发明提供的制备方法将微生物发酵技术应用于植物活性成分提取，有效提高油茶籽中黄酮苷的提取率，可用于工业化生产。

技术领域

本发明涉及微生物发酵及植物提取物技术领域，尤其涉及一种从油茶籽中制备黄酮苷的方法。

背景技术

油茶树是我国特有的木本油料树种，属山茶科山茶属，从南宋年间开始种植至今已有2300多年的历史，并且分布广、产量大，药用收载部位多。素有“东方橄榄油”、“油中珍品”、“绿色油库”、“绿色金库”之美誉，与油橄榄、油棕、椰子并称“世界四大木本油料树种”。

油茶籽主要用于生产茶油和茶皂素，并有大量研究表明其具有一定的生物活性和药理作用。近年来，国内外对油茶籽进行了一系列的研究，发现其中还含有黄酮类成分，主要是由山萘酚、黄烷酮及其糖苷组成，含量一般为0.1％～0.2％。黄酮苷是油茶籽中重要的活性成分，具有良好的清除自由基的作用，可以通过抑制一些细胞中的促炎因子如iNOS和COX-2的表达而起到优良的抗炎效果，有潜力开发为治疗炎症的临床药品，作为天然植物源药品，可以避免甾族和非甾族抗炎药的副作用。

申请号为CN201510345178.4的专利文献公开了“高速逆流色谱制备油茶籽壳中黄酮类化合物的方法”，该方法以油茶籽壳为原料制得2个黄酮类化合物，该专利中使用多种有机溶剂。申请号为CN201310297274.7的专利文献公开了“一种降血糖油茶黄酮的制备方法及其应用”，利用油茶籽榨油后的饼粕，进行降血糖活性成分的制备分离，不足之处在于该方法利用传统树脂进行分离纯化，耗时长。申请号为CN201010229218.6的专利文献公开了“一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法”，得到95％以上的黄酮苷单体，但该工艺步骤繁琐，操作不简便。

发明内容

本发明的目的是提供一种从油茶籽中制备黄酮苷的方法，利用微生物发酵法和有机溶剂萃取技术，使油茶籽中的活性成分黄酮苷被充分提取出来。

为达到上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种从油茶籽中制备黄酮苷的方法，包括：

(1)将油茶籽脱脂后制成液体培养基，然后接入黑曲霉菌进行发酵；

(2)发酵结束，将发酵料灭菌过滤，滤渣干燥粉碎后用醇-水溶液进行提取；

(3)提取完成后过滤，滤液浓缩至无醇再加入极性溶剂萃取，收集水液层；

(4)水液层用乙酸乙酯进行萃取，收集乙酸乙酯层，浓缩，干燥，得到黄酮苷提取物。

步骤(1)中，油茶籽可采用石油醚于30～80℃进一步为40～80℃回流进行脱脂。所述石油醚与油茶籽的体积比为(2～3):1。

所述液态培养基由血粉、磷酸氢二钾、硫酸镁和水组成。以重量份计，组成为：油茶籽粕9～11份，血粉1～3份，磷酸氢二钾0.01～0.03份，硫酸镁0.008～0.009份，水15～18份；进一步组成为：油茶籽粕10份，血粉2份，磷酸氢二钾0.016份，硫酸镁0.008份，水16份。

所述发酵包括：将黑曲霉菌活化后制成种子液，然后接入液态培养基中进行发酵。

所述发酵时的接种量为5-8％。

发酵的温度、转速、时间会影响产物的产率和纯度，所述发酵的温度为20～40℃，摇床转速为100～250rpm，发酵时间为3～8d；进一步优选的，所述发酵的温度为30～35℃，摇床转速为150～200rpm，发酵时间为4～6d；更优选的，所述发酵的温度为30℃，摇床转速为180rpm，发酵时间为4d。