[发明专利]利用RPA技术检测寨卡病毒的方法及其专用成套试剂

说明书

本发明公开了利用RPA技术检测寨卡病毒的方法及其专用成套试剂。该成套试剂由引物对X和探针X组成，引物对X由序列表中序列3所示的引物F和序列表中序列2所示的引物R组成，探针X从5’至3’依次包括DNA片段甲、四氢呋喃和DNA片段乙，DNA片段甲和DNA片段乙分别为序列表中序列4和序列5所示的单链DNA分子。实验证明，采用本发明提供的成套试剂进行RPA可以检测寨卡病毒，特异性好且灵敏度高。本发明具有重大的实用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及利用RPA技术检测寨卡病毒的方法及其专用成套试剂。

背景技术

寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)属于黄病毒科黄病毒属，由蚊虫叮咬传播。1947年首次从乌干达的寨卡森林的恒河猴血液中发现寨卡病毒。寨卡病毒感染后症状通常都很轻微，很长一段时间，寨卡病毒感染一直都不被重视。从2015年开始，寨卡病毒引起了世界范围内的流行，在巴西有超过100万以上的寨卡病毒感染病例。在中国，也发现了多起寨卡病毒感染的病例。研究表明，寨卡病毒感染可引起新生儿小头症，并且还与其它新生儿缺陷有关。研制寨卡病毒的快速检测试剂，对于控制寨卡病毒的传播，并及时采取有效的防控策略至关重要。

人类目前针对寨卡病毒的检测主要依靠荧光定量PCR技术。荧光定量PCR技术具有较高的灵敏性，但需要昂贵的温控设备、特定的实验室场地和专业技术人员操作，且检测时间长，仪器体积大，不适用于突发传染病的现场快速检测。因此，建立一种快速简便的核酸检测技术，该技术对寨卡病毒的现场快速筛查和检测具有重要价值。

重组酶聚合酶等温核酸扩增(Recombinase polymerase amplification，RPA)技术是由Piepenburg等人建立的一种新型核酸等温扩增技术，该技术依赖于三种酶(结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶)对DNA模板进行扩增。在37℃-42℃之间，核酸模板无需变性，20min之内即可完成整个扩增过程。RPA技术操作简单，设备要求低，具有灵敏度高、特异性高等特点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是快速、准确的检测寨卡病毒。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种检测寨卡病毒的成套试剂，可由引物对X和探针X组成；

所述引物对X可由引物F和引物R组成；所述引物对X的靶序列可含有特异DNA片段；所述特异DNA片段可为如下y1)或y2)：

y1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

y2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述探针X可为46-52个核苷酸组成的单链DNA分子，从5’至3’依次可包括DNA片段甲、外切酶exo的切断位点和DNA片段乙；

所述DNA片段甲可为30-35个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段上的区段甲部分相同；

所述DNA片段乙与所述特异DNA片段上的区段乙部分相同；

所述区段甲和所述区段乙在所述特异DNA片段上无重叠。

所述区段甲和所述区段乙均为所述特异DNA片段上连续的DNA片段。

上述成套试剂中，所述探针X从5’至3’具体可由DNA片段甲、外切酶exo的切断位点和DNA片段乙组成。

所述外切酶exo的切断位点具体可为四氢呋喃。

所述引物F可为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列3所示的单链DNA分子；

a2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子。