本发明涉及含有U6启动子的流感病毒报告质粒及其构建方法和应用,属于报告质粒构建领域。该报告质粒包括U6启动子序列和功能目的片段,所述功能目的片段包括IAV基因的3’NCR序列、一段正向插入的报告基因序列、IAV基因的5’NCR序列;还有由6个胸腺嘧啶组成的终止子序列。功能目的片段的核苷酸序列如SEQ I D NO.1或SEQ I D NO.2所示。该报告质粒利用U6启动子转录,克服了种属间差异,并可在广泛宿主体内表达。本发明利用该报告质粒作为检测病毒复制的分子模型,可快速检测病毒复制及其流感病毒聚合酶活性。同时,该报告质粒还可用于抗流感病毒的药物筛选,后续还可用于流感疫苗的疗效评价。
本发明涉及一种流感病毒诱导表达的eGFP/Gluc报告质粒及其构建方法和应用,属于报告质粒构建领域。该报告质粒包括功能目的片段,功能目的片段的中间为一段反向插入的报告基因,其侧翼序列为IAV基因片段,其两端的外侧为具有自剪切功能的核酶,功能目的片段核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明利用流感病毒感染诱导荧光成像与生物成像的报告质粒作为检测病毒复制的分子模型,可快速检测病毒复制。同时,该报告质粒还可用抗流感病毒药物筛选与流感疫苗中和抗体的中和滴度的评价。另外,该报告质粒的启动子为CMV,可克服种属差异性,可在广泛宿主体内表达。
本发明公开了检测蜱传脑炎病毒感染的系统。本发明所提供的检测蜱传脑炎病毒感染的系统,由蜱传脑炎病毒抗原和荧光素酶NanoLuc组成的融合蛋白以及利用荧光素酶免疫共沉淀技术检测是否感染蜱传脑炎病毒所需的其他试剂和/或仪器组成;所述融合蛋白为下述I1)或I2)的蛋白质:I1)SEQ ID No.1所示的蛋白质;I2)在SEQ ID No.1的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由I1)衍生的蛋白质。实验证明,本发明的Nanoluc‑EIII和检测蜱传脑炎病毒感染的系统可以在37℃和室温下检测人的血清是否被蜱传脑炎病毒感染。
本发明公开了检测蜱传脑炎病毒感染血清的试剂盒。本发明所提供的试剂盒为试剂盒1或试剂盒2。试剂盒1含有蜱传脑炎病毒抗原;蜱传脑炎病毒抗原为序列表中SEQ ID No.1的第320-412位氨基酸所示的蛋白质;试剂盒2含有蜱传脑炎病毒抗原和海肾荧光素酶的融合蛋白;所述融合蛋白为序列表中SEQ ID No.1所示的蛋白质。实验证明,本发明的试剂盒可用来检测TBEV感染的临床阳性病人血清和TBEV阴性感染血清。