[发明专利]一种高产二萜类成分的酵母工程菌在审
| 申请号： | 201810177892.0 | 申请日： | 2018-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN108395997A | 公开（公告）日： | 2018-08-14 |
| 发明（设计）人： | 高伟;黄璐琦;胡添源;周家伟 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/90;C12P9/00;C12P15/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知识产权代理有限公司 11340 | 代理人： | 陆军 |
| 地址： | 100069 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母工程菌 二萜类化合物 基因 合成酶 改造 高产 表达水平 二萜 菌株 代谢 生产 | ||
1.一种高产二萜类化合物的酵母工程菌，其特征在于，在所述酵母工程菌中过表达：(a)催化IPP和DMAPP依次生成FPP和GGPP的融合酶基因BTS1/ERG20，(b)催化IPP和DMAPP生成GGPP的嗜酸热硫化叶菌牻牛儿牻牛儿焦磷酸合酶基因SaGGPS，及(3)HMG-CoA还原酶基因的催化活性域tHMG1；并且，所述酵母工程菌敲除了ROX1基因、YJL064w基因、YPL062w基因、ERG9启动子激活域(ERG9p)中的任意一种或多种。
2.根据权利要求1所述酵母工程菌，其中所述融合酶基因BTS1/ERG20由启动子PPGK1调控，所述基因SaGGPS由启动子PTDH3调控，所述基因tHMG1由启动子PTEF1调控。
3.根据权利要求1所述的酵母工程菌，其中所述酵母工程菌敲除了ROX1基因，或敲除了YJL064w基因，或敲除了YPL062w基因，或敲除了ERG9p，或同时敲除了ROX1基因和ERG9p，或同时敲除了ROX1基因、ERG9p和YJL064w基因，或同时敲除了ROX1基因、ERG9p、YJL064w和YPL062w基因。
4.根据权利要求1所述重组酵母菌，其中所述酵母菌为GEN.PK系酿酒酵母菌或BY系酿酒酵母菌，优选为BY系酿酒酵母，更优选为BY4741酿酒酵母、BY4742酿酒酵母或BY-T20酿酒酵母。
5.构建权利要求1-4中任意一权利要求所述酵母工程菌的方法，所述酵母工程菌是采用CRISPR/Cas9基因编辑技术改造获得的，所述CRISPR/Cas9基因编辑技术改造酵母工程菌的方法包括：选择预敲除目的基因的gRNA靶位点序列、构建含有预敲除目的基因的gRNA载体质粒、设计介导预敲除目的基因的同源重组修复双链DNA(dsOligo)、制备含Cas9载体的酵母感受态细胞、将含有预敲除目的基因的gRNA载体质粒及dsOligo转化至Cas9载体酵母感受态细胞中，获得突变成功的目的酵母工程菌株。
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