[发明专利]一种快速检测甲、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测样本甲、乙型流感病毒的核酸检测试剂盒盒，该试剂盒包括核酸裂解溶液，其中，核酸裂解溶液中包括磁珠，所述的核酸裂解溶液包括1M NaCl、0.01%Triton‑X和0.001M KCl，磁珠为0.005微升的10mg/mL的羟基磁珠。利用该是试剂盒可以一步法提取核酸而不进行额外的步骤，可以快速简单的进行核酸的扩增检测，可以实现全自动化的操作。

技术领域

本发明属于分子诊断生物学技术领域，涉及一步法核酸提取及荧光定量PCR检测试剂盒，具体涉及含2个探针的实时荧光定量PCR试剂，检测患者血液、尿液、脑脊液或者拭子中的等样本中甲、乙型流感病毒的新型试剂盒。

背景技术

流行性感冒(简称流感)是流感病毒引起的急性呼吸道感染，也是一种传染性强、传播速度快的疾病。其主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播，常引起发热、乏力、肌肉酸痛以及轻到中度的呼吸道症状，重者可致肺炎、心肌炎和心衰。一般秋冬季节是其高发期，所引起的并发症和死亡现象非常严重。典型的临床症状是：急起高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状。该病是由流感病毒引起；流感病毒为属正粘液病毒科，可分为甲型流感病毒(Influenza A virus)，乙型流感病毒(Influenza Bvirus)和丙型流感病毒(Influenza C virus)三型，甲型病毒经常发生抗原变异，传染性大，传播迅速，极易发生大范围流行。乙型流感通常是引起流感的局部爆发，抗原变异小，有时候也可以成为强势毒株。丙型流感病毒的抗原稳定，主要感染侵袭婴幼儿，一般不引起流感流行，但仍可严重发病并引起地方性大爆发。流感病毒主要依靠实验室进行确切诊断，常规的诊断方法主要包括血清学检测和病原分离和鉴定这两个方面。

近年来，分子生物学方法不断的被应用到病毒的快速检测中，其中流感病毒的核酸检测尤其是基于Taqman技术的荧光定量PCR分子检测成为流感病毒检测诊断的主要发展方向。Taqman探针检测为包括5‘端报告基因即荧光基团和3’端的淬灭基团。当探针完整时，淬灭基因与报告基因接近而被淬灭，导致无荧光产生，在PCR反应延伸过程中，Taq酶的5‘-3’外切核酸酶活性将与模板结合的探针切断，导致报告基因与淬灭基团分离，产生荧光信号；每一轮PCR循环中，都有新的报告基因被剪切，而且荧光信号强度与扩增产物成正比。

运用PCR技术检测病毒RNA主要包括病毒核酸的提取和核酸的PCR扩增，但是传统技术对于RNA提取过程过于复杂，而且涉及的步骤繁琐，耗材花费大，而是特备耗时。

发明内容

针对上述问题，所以我们提供了一种磁珠法对样本中的进行快速核酸裂解吸附的一步法试剂盒并保持较好的检测灵敏度。利用磁珠直接对样本进行提取，而不需要样本的纯化和洗涤，直接用磁珠和扩增的试剂接触进行核酸的扩增，减少了操作步骤，同时，避免了杂质对检测的干扰。

本发明一方面提供一种检测样本中甲、乙型流感病毒的核酸检测试剂盒，该试剂盒包括裂解液和磁珠悬浮液，其中，裂解液的成分包括1M NaCl、0.01％Triton-X和0.001MKCl，磁珠悬浮液包括羟基修饰的磁珠，多分散系数＜0.2；磁珠为直径小于或等于500nM，其中，磁珠的含量为10mg/mL。

在一些优选的方式中，当裂解液和磁珠溶液混合的时候，两者的体积比为200:1。

或者，提供一种混合物，该混合物为溶液混合物，该混合物中包括1M NaCl、0.01％Triton-X和0.001M KCl和0.005微升的10mg/mL的羟基磁珠；再或者，溶液中含有0.005毫克的羟基磁珠。或者，按照表1的方式提供磁珠裂解液，该磁珠裂解液由裂解液和磁珠液按照体积200：1的方式混合而成。