[发明专利]一种高淀粉含量谷物籽粒剖析及内部结构观察的方法

权利要求书

1.一种高淀粉含量成熟谷物籽粒的预处理方法，其特征在于，所述方法包括水分平衡、固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、展片和荧光染色；所述水分平衡是将谷物籽粒的水分调节至16%；所述固定，是将平衡后的谷物籽粒浸泡于体积比为1:1:1:1的福尔马林、多聚甲醛、戊二醛、冰醋酸固定液中，抽真空，0.5MPa负压30min；所述脱水，是将固定后的籽粒干燥至水分含量为5%以下；所述浸蜡是在40℃环境下进行；所述浸蜡是将脱水后的籽粒在石蜡中预浸1~30 min后转移至另一份石蜡中渗透30~120 min；所述脱水是将多余的固定液吸取后，浸泡在液氮中1~10 min，再真空干燥40~60 min；所述水分平衡是在30~50℃，湿度60-100RH%的环境下进行水分调节；

荧光染色步骤为（a）或（b）：

（a）分别采用浓度为0.001-1g/mL的罗丹明、甲基红、尼罗红、异硫氰酸荧光素或甲基橙染料，按照蛋白质、脂肪、淀粉的顺序进行染色；其中，蛋白质采用罗丹明或甲基红染色；脂肪采用尼罗红染色；淀粉采用异硫氰酸荧光素或甲基橙染色；每种染料染色后均用30~50%的乙醇反复冲洗2~3次，染色、洗涤过程中避光处理；

（b）采用浓度为0.001-1g/mL的复配染液进行染色，所述复配染液含有罗丹明、甲基红、尼罗红、异硫氰酸荧光素、甲基橙中的至少两种；用于淀粉和蛋白质染色时，淀粉染料的浓度控制在比蛋白质染料浓度高5-20倍；用于淀粉和脂肪染色时，淀粉染料的浓度控制在比脂肪染料浓度高2-10倍；用于脂肪与蛋白质染色时，脂肪染料的浓度高于蛋白质染料浓度的2-10倍；所述淀粉染料含有异硫氰酸荧光素或甲基橙；所述脂肪染料含有尼罗红；所述蛋白质染料含有罗丹明或甲基红；染色后用30~50%的乙醇反复冲洗2~3次，染色、洗涤过程中避光处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述谷物包括玉米、小麦、大麦、藜麦、大米、小米、绿豆、红豆或大豆。

3.一种高淀粉含量成熟谷物籽粒剖析及内部结构观察的方法，其特征在于，应用权利要求1或2所述的方法进行预处理，再进行观察。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述观察在光学显微镜下观察。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述观察在激光共聚焦显微镜或荧光显微镜下观察。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）取样：从收获的谷物中挑选颗粒饱满的完全籽粒，进行脱壳、去皮处理；

（2）水分平衡：将获取的籽粒放置于密闭的容器中，进行湿度调节；使得籽粒水分保持在16%；

（3）固定：将平衡后籽粒取出，浸泡于复配固定液中，抽真空，负压30min；

（4）脱水：取固定后籽粒，吸去多余固定液，浸泡于液氮中1-10min，随后真空干燥60min；

（5）浸蜡：融化一定量的石蜡，分成两份，将脱水后籽粒在其中一份中预浸1-30min后取出放置于另一份石蜡中渗透30min-120min，浸蜡均在40℃环境下进行；

（6）包埋：取浸蜡后的籽粒放置于模具中，同时倒入融化后的石蜡，平衡30-60min；

（7）切片：将包埋后模具放于低温平台上固化石蜡，随后使用切片机切片，并根据具体测定需求控制籽粒厚度，连续切片至连续截面出现；

（8）展片：捞取步骤（7）的切片，镊取连续样品切片面平展的粘附于表面涂有聚合黏胶或贴有专用胶带的载玻片上，将载玻片置于载物台上；

（9）脱蜡：将载有籽粒截面的载玻片放置于烘箱中，常温吹干，随后用脱蜡剂脱蜡；

（10）样品观察：将固定在载物台上样品进行SEM、TEM、自发荧光预处理，进行对应的显微观察；

（11）染色观察：根据所需观察目的进行样品处理，并根据不同观察目的及组分特性进行染色处理。

7.权利要求1~6任一所述方法在食品领域的应用。