[发明专利]一种扩增MSF1基因的方法及试剂盒与应用

说明书

本发明涉及一种MSF1基因DNA扩增方法，以及通过分析MSF1基因的甲基化状态来辅助诊断宫颈癌的方法和试剂盒及其应用。

技术领域

本发明涉及一种MSF1基因DNA扩增方法，以及通过分析MSF1基因的甲基化状态来辅助诊断宫颈癌的方法和试剂盒及其应用。

背景技术

已有研究表明人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生的高危因素。通过观察细胞形态的宫颈液基薄层细胞检测(TCT)联合HPV检测是目前临床用于筛查宫颈癌的主要方法。TCT受人为干扰因素大，从取样-涂片-观察-判读都受人为因素的影响；而HPV感染多提示短暂性感染，对预测宫颈癌的发生价值相对较低。目前从肿瘤发生的分子机制入手来寻找肿瘤早诊的分子标志物已经成为一种趋势。基因启动子区域CpG岛甲基化能使基因表达沉默，从而引起一系列细胞的分子水平事件。目前国际已经公认基因甲基化是肿瘤发生进展过程中的早期事件。因此通过检测基因的甲基化对于预测细胞的癌变已经开始应用在不同的肿瘤早期诊断上，例如通过外周血中游离DNA的基因甲基化早诊大肠癌；通过分析肺泡灌洗液细胞中基因甲基化早诊肺癌，等等。

但是，现有的检测甲基化的方法普遍存在位点特异性较差，干扰信号过高，反应灵敏度不够等问题，因此迫切需要一种能够高通量、高特异性、高灵敏度扩增目标基因位点的PCR扩增方法。

发明内容

本公开的一个目的是提供一种MSF1基因DNA扩增方法，所述方法包括：将待测标本、对照基因进行PCR反应，其中PCR反应中DNA标本是经过亚硫酸氢盐处理的、转化后的DNA标本，优选地，所述PCR扩增反应体系中包括3`端进行了去羟基化修饰的封闭探针。

本公开的一个目的是提供一种MSF1基因DNA扩增方法，所述方法包括：将待测标本、对照基因进行荧光定量PCR反应，其中PCR反应中DNA标本是经过亚硫酸氢盐处理的、转化后的DNA标本，所述PCR扩增反应体系中包括3`端进行了去羟基化修饰的封闭探针。

本发明的一个目的是通过分析宫颈癌患者以及非宫颈癌对照人群的宫颈组织中MSF1基因的启动子区域的甲基化程度存在明显差异，从而证明通过检测MSF1的甲基化可以作为辅助诊断宫颈癌的生物标志物。

本公开的一个目的在于提供实现检测MSF1基因甲基化的方法试剂盒及其使用方法。

本公开针对MSF1基因的第三种转录本的第1号外显子上的CpG岛的甲基化进行检测。

在一方面，本公开涉及一种MSF1基因扩增方法，所述方法是基于PCR的方法，包括：(1)PCR引物设计；(2)样品DNA提取；(3)DNA的甲基化修饰转化；(4)PCR扩增。PCR扩增后的产物可以进行常规实验室分析，包括但不限于电泳分析，定量分析，相互作用分析，DNA片段提纯，测序分析等。在进一步的一方面，本公开涉及一种MSF1基因扩增方法，所述方法是基于荧光定量PCR的方法，包括：(1)PCR引物设计；(2)探针设计；(3)样品DNA提取；(4)DNA的甲基化修饰转化；(5)荧光定量PCR扩增。

在一方面，任选地本公开的PCR引物包括检测MSF1基因的引物和对照基因引物，优选地所述对照基因是ActB基因。

在一方面，任选地本公开的探针包括检测MSF1基因甲基化位点和对照基因的探针，优选地，还包括封闭MSF1基因非甲基化位点的探针。

在一方面，任选地本公开的样品DNA是体外样本，包括血液、体液、组织样本等，任选地，所述样本来自于临床样本，优选地，所述样本是宫颈组织，和宫颈细胞刷片。

在一方面，任选地本公开的样品DNA采用商业化试剂盒进行提取，例如天根生化科技(北京)有限公司的TIANamp Genomic DNA kit(离心柱法)。