[发明专利]一种登革热病毒和寨卡病毒快速荧光PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种登革热病毒和寨卡病毒快速荧光PCR检测试剂盒，由以下试剂组分组成：RT‑PCR Buffer、登革/内参引物探针混合液A、寨卡/内参引物探针混合液B、酶系C、阳性对照、阴性对照，所述的RT‑PCR Buffer的组分为50mM tris‑HCL，75mM Kcl，3mM Mgcl2,10mM DTT，所述的登革/内参引物探针混合液A的组分为寨卡病毒和内参基因引物、探针，所述的寨卡/内参引物探针混合液B的组分为寨卡病毒和内参基因引物、探针，所述的酶系C的组分为0.1U/μl Hitaq热启动DNA聚合酶、2.4U/μl super M‑MLV反转录酶、0.32U/μl RRI，所述的阳性对照采用含有登革热病毒和寨卡病毒目的基因片段的质粒菌，所述的阴性对照采用DEPC‑H₂O。本发明具有检测速度快、灵敏度较高等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域领域，具体来说是一种登革热病毒和寨卡病毒快速荧光PCR检测试剂盒。

背景技术

登革病毒(dengue virus)属于黄病毒科，黄病毒属，单股正链RNA病毒，依据抗原性不同分为4种型别，即I/II/III/IV型，登革热(dengue fever)是由伊蚊传播登革病毒(dengue virus)引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊或白纹伊蚊为媒介进行传播。其特点为急性起病，发热，全身肌肉、骨、关节痛，极度疲乏，皮疹，淋巴结肿大及血液白细胞、血小板减少。

寨卡病毒(Zika Virus)属黄病毒科，黄病毒属，单股正链RNA病毒，直径20nm，是一种通过蚊虫进行传播的虫媒病毒，宿主不明确，主要在野生灵长类动物和栖息在树上的蚊子，如非洲伊蚊中循环。寨卡病病毒临床特征主要为发热、皮疹、关节痛或结膜炎，极少引起死亡。世界卫生组织(WHO)认为，新生儿小头畸形、格林-巴利综合征(吉兰-巴雷综合征)可能与寨卡病毒感染有关。带病毒的伊蚊叮咬是本病最主要的传播途径，亦可通过母婴传播，包括宫内感染和分娩时感染。乳汁中可检测到寨卡病毒核酸，但尚无通过哺乳感染新生儿的报道。罕见血源传播和性传播。

登革热病毒和寨卡病毒广泛流行于热带和亚热带地区，超过125个国家和地区出现过登革热病毒感染。我国与1978年在广东福山首次发现登革热病毒，以后再海南、广西、福建、浙江、云南等地均有发现，特别是2014年广东省登革热流行，感染人数超过4万，数人死亡。2015年台湾登革热流行造成3万人感染，死亡140多人。我国南方部分地区存在可传播寨卡病毒的媒介伊蚊，近年来与之传播方式相似的登革热输入性疫情持续增多，并在南方部分省份引起了较大规模的暴发疫情。随着与相关国家或地区人员往来的日益密切，我国存在寨卡病毒输入风险。根据监测，我国有与传播寨卡病毒有关的伊蚊种类主要为埃及伊蚊和白纹伊蚊，其中埃及伊蚊主要分布于海南省、广东省雷州半岛以及云南省的西双版纳州、德宏州、临沧市等地区；白纹伊蚊则广泛分布于我国河北、山西、陕西以南广大区域。特别是我国南方地区夏秋季节伊蚊密度较高，一旦有病例输入，不排除在局部地区发生本地传播扩散的可能。

目前，市场上的试剂盒普遍存在检测灵敏度低、检测速度较慢的缺陷，需要进行有效的改进。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的检测灵敏度差、速度较慢的缺陷，提供一种登革热病毒和寨卡病毒快速荧光PCR检测试剂盒来解决上述问题。

为了实现上述目的，发明的技术方案如下：本发明公开了一种登革热病毒和寨卡病毒快速荧光PCR检测试剂盒，由以下试剂组分组成：RT-PCR Buffer、登革/内参引物探针混合液A、寨卡/内参引物探针混合液B、酶系C、阳性对照、阴性对照。

作为优选，本发明公开了一种登革热病毒和寨卡病毒快速荧光PCR检测试剂盒，由以下试剂组分组成：RT-PCR Buffer 384μl、登革/内参引物探针混合液A 48μl、寨卡/内参引物探针混合液B 48μl、酶系C 96μl、阳性对照400μl、阴性对照400μl。