[发明专利]pORF65重组蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种编码pORF65重组蛋白的表达基因，其特征是，其序列为a：其核苷酸序列如SEQID NO.22所示；或b：与a的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与a的核苷酸序列不同的序列。

2.pORF65重组蛋白，其特征是，所述pORF65重组蛋白的制备方法包括以下步骤：

包含权利要求1所述编码pORF65重组蛋白的表达基因序列通过HindIII/XhoI双酶切插入pET32a(+)载体，构建重组质粒pET32a-mod pORF65；

再转入DH5α，PCR筛选阳性转化菌株，阳性菌株测序鉴定后提取质粒，分别转入BL21(DE3)表达菌株；

挑取转化pET32a-mod pORF65的BL21(DE3)表达菌株，接种于Amp抗性的LB培养基中培养过夜，再接种于LB新鲜培养基中，再加入IPTG诱导表达、纯化，即得。

3.权利要求2所述的pORF65重组蛋白的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

包含权利要求1所述编码pORF65重组蛋白的表达基因序列通过HindIII/XhoI双酶切插入pET32a(+)载体，构建重组质粒pET32a-mod pORF65；

再转入DH5α，PCR筛选阳性转化菌株，阳性菌株测序鉴定后提取质粒，分别转入BL21(DE3)表达菌株；

挑取转化pET32a-mod pORF65的BL21(DE3)表达菌株，接种于Amp抗性的LB培养基中培养过夜，再接种于LB新鲜培养基中，再加入IPTG诱导表达、纯化，即得。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述编码所述pORF65重组蛋白的表达基因的序列如SEQ ID NO.22所示。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征是，如SEQ ID NO.22所示的编码所述pORF65重组蛋白的表达基因其是通过SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.14扩增得到的。

6.权利要求2所述的pORF65重组蛋白在制备检测锦鲤的血清特异性抗体的试剂盒中的应用。

7.检测锦鲤的血清特异性抗体的试剂盒，其特征是，包括有权利要求2所述的pORF65重组蛋白。

8.根据权利要求7所述的检测锦鲤的血清特异性抗体的试剂盒，其特征是，所述试剂盒为ELISA试剂盒，包括有用权利要求2所述pORF65重组蛋白包被的酶标板。

9.根据权利要求7或8所述的检测锦鲤的血清特异性抗体的试剂盒，其特征是，还包括有鼠抗锦鲤IgM的多克隆抗体。