[发明专利]一种多肽、多肽-siRNA诱导共组装体及其用途

说明书

本发明提供了一种多肽，其结构式如下所示，本发明还提供了一种多肽‑siRNA诱导共组装体，由上述的多肽和siRNA组成。本发明还提供了上述的多肽‑siRNA诱导共组装体在细胞运载中的用途。本发明还提供了上述的述的多肽‑siRNA诱导共组装体在制备治疗宫颈癌的药物中的用途。将本发明多肽与目标siRNA在常温下混合孵育5min后，即可形成稳定均一的纳米粒子。细胞毒性实验证明这种共组装纳米粒子具有较高的生物相容性，其细胞毒性和溶血毒性都很低。抗细胞增殖实验进一步证实多肽‑siRNA纳米粒子可以有效地将宫颈癌细胞系HeLa阻断在G2期，阻滞其生长。

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及一种多肽，具体来说是一种多肽、多肽-siRNA诱导共组装体及其用途。

背景技术

RNAi技术是最广泛应用的生物学技术之一，由于RNAi技术对特定基因mRNA的高度特异性和高效性表达调控。因此，RNAi技术被广泛的用于功能基因组学、遗传学、基因治疗、病毒性疾病治疗等许多领域。然而，无论在体内还是体外，siRNA都很容易被广泛存在的RNase降解，并且siRNA无法单独穿过细胞膜引发RNAi效应，因此，RNAi技术离不开高效，低毒的siRNA运载体的帮助。

常用的siRNA转染载体有病毒载体、脂质体、高聚物、无机纳米粒子、多肽生物载体等。其中病毒载体是一类以腺病毒、逆转录病毒和慢病毒为主的siRNA载体。病毒载体是已知的转染效率最高的siRNA载体之一，但是因为病毒有可能不可控的插入宿主的基因组中，因此，出于安全性和操作复杂性的考虑，病毒类载体的应用受到了很大的限制。

以脂质体和高聚物为代表的一类化学修饰载体是目前应用最广泛的一类siRNA载体。其中脂质体(如:lipo-2000)是由一个亲水性的头部和一个疏水性的尾部组成的两亲性分子，脂质体在水中可以与siRNA形成均一稳定的复合物，将siRNA包裹在有脂质体分子组成的空腔内，并通过内吞或者膜融合的方式进入细胞，并进一步释放出内部的siRNA分子，引发RNAi效应。但是，由于脂质体自身对于细胞膜有较强的细胞毒性，有脂质体介导的siRNA转染一般在较低的脂质体浓度下进行，并且主要限制在体外和细胞水平的转染。

以聚乙烯亚胺PEI和PLL等阳离子聚合物为代表的高聚物是另一类广泛应用的siRNA运载体，PEI分子利用静电作用负载包裹siRNA，通过内吞作用进入细胞后，利用质子海绵效应使内吞体破裂，促进siRNA的释放。随着PEI分子量的增大，能够负载的siRNA的含量也越多，但同时细胞毒性也越大。因此对于PEI分子，再未进一步优化之前，一般只用于低剂量的细胞水平的转染。

无极金属纳米粒子是一种以纳米金为代表的新型siRNA载体。其主要通过静电相互作用与siRNA结合，通过内吞作用进入细胞内，并成功释放，引发RNAi效应。其转染效率较高，并且对细胞没有急性毒性作用，但是由于无机金属纳米粒子太过稳定，很难被生物体清除，易导致金属纳米粒子在体内的堆集，引发潜在的毒性反应，从而极大的限制其应用。

这些载体虽然都可以实现siRNA的有效的转染，但同时也存在着各自的问题，对于复杂体系内的siRNA运载，依然有许多限制和无法实现的困难。方便，简单，高效，安全的siRNA运载方式依然是科研工作者关注的方向。