[发明专利]一种用于鉴定中药麝香的PCR方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴定中药麝香的PCR方法。该方法包括：从待测中药样品中提取基因组DNA作为模板，采用引物对(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2)进行PCR扩增；对所得PCR产物进行测序；将测序序列与标准序列进行比较，如果测序序列与所述标准序列完全一致或者仅有1个核苷酸的差异，则待测中药样品为麝香；或者以测序序列和标准序列构建NJ树，如果测序序列与标准序列在NJ树的同一个分枝上，则待测中药样品为麝香。本发明所建立的用于鉴定中药麝香的PCR方法快速、准确、科学性强且使用方便，对于确保药材市场中麝香的质量及其临床疗效具有重要意义。

技术领域

本发明属于中药鉴定领域，涉及一种用于鉴定中药麝香的PCR方法。

背景技术

麝香是麝科动物林麝Moschus berezovskii Flerov.,马麝M.sifanicusPrzewalski或原麝M.moschiferus L.成熟雄性香囊的干燥分泌物。收载于2015年及即将实施的2020年版《中国药典》。麝香具有开窍，通经络，消肿止痛的功效，临床用于邪蒙心窍、神志昏迷，功效卓著。

由于麝香来源极其有限,市场销售价格昂贵，所以市场上出现较多的伪品和掺杂品，常见的有鼠科动物麝鼠Ondatra zibethicus Linnaeus的麝鼠香，也有掺入鸡Gallusgallus Linnaeus的血块，羊Ovis aries Linnaeus的粪便，牛内脏等动物的组织和分泌物的掺伪品。为保证用药安全有效，需对其进行真伪鉴别。且不同种来源的麝香价格具有差异，应用也有不同。目前虽然有很多生药学的方法对麝香进行鉴定，但均难以准确鉴别麝香来源于哪种麝的基原物种。此外，也有研究表明可采用DNA条形码技术对麝香的原动物进行鉴别，但只能鉴定麝的肌肉、组织或毛发，均无法从麝香(即麝的分泌物)中获得DNA片段或对其进行PCR扩增，无法对中药麝香进行鉴别。

为确保药材市场中麝香的质量及其临床疗效，需要建立快速、准确、科学性强、使用方便的方法进行鉴定。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于鉴定中药麝香的PCR方法。

第一，本发明要求保护一种用于鉴定中药麝香的PCR方法。

本发明所提供的用于鉴定中药麝香的PCR方法，可包括如下步骤：

(a)从待测中药样品中提取基因组DNA作为模板，采用引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；

所述引物对为如下(a1)或(a2)所示的引物对：

(a1)由SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物组成的引物对；

(a2)由(a1)中的上游引物和/或下游引物经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列组成的，且与(a1)中所述引物对功能相同的引物对；

(b)对步骤(a)所得PCR产物进行测序，获得测序序列；

(c)按照如下(c1)或(c2)确定所述待测中药样品是否为麝香：

(c1)将所述测序序列与标准序列进行比较，如果所述测序序列与所述标准序列完全一致或者仅有1个核苷酸的差异，则所述待测中药样品为或候选为麝香；反之，则所述待测中药样品不为或候选不为麝香；

(c2)以所述测序序列和所述标准序列为数据源，构建NJ树，如果所述测序序列与所述标准序列在NJ树的同一个分枝上，则所述待测中药样品为或候选为麝香；反之，则所述待测中药样品不为或候选不为麝香；

所述标准序列选自如下任一：SEQ ID No.3所示核苷酸序列(对应马麝)、SEQ IDNo.4所示核苷酸序列(对应林麝)、SEQ ID No.5所示核苷酸序列(对应原麝)。