[发明专利]一种曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂

说明书

本发明公开了一种曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂，其制备方法包括：预处理、分离、复合，将新鲜曼氏无针乌贼脑组织经冷冻液冻存，然后加入三氟乙酸水溶液匀浆并离心取清液，然后经RP‑HPLC高效液相系统分级分离制得神经肽GnRH，将神经肽GnRH与神经肽GnRH类似物在10‑樟脑磺酸与金属镧存在的条件下发生反应，即得曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂。有益效果为：曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂被机体吸收后，通过受体机制对垂体促性腺细胞分泌卵泡刺激素、黄体生成素进行调控，最终引起细胞内GnRH受体合成、卵泡刺激素、黄体生成素合成和分泌、细胞生长、分化、增殖等生殖调控。

技术领域

本发明涉及生殖调控饲料添加剂领域，尤其是涉及一种曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂。

技术背景

曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni de Rochebrune)是一年生的中型乌贼，俗名叫墨鱼，生长快，肉质鲜美，是受市场欢迎的海味食品。头足纲，乌贼科。胴部盾形。胴长为胴宽的2倍。胴背具许多近椭圆形的白花斑。肉鳍前狭后宽，位于胴部两侧全缘，仅在末端分离。无柄腕长度一般为4＞3＞1＞2，吸盘4行。雄性左侧第四腕茎化。触腕穗狭柄形，吸盘约20行，小而密。内科椭圆形。记录最大胴长0.19m，最大体重0.7kg。分布在西北太平洋和北印度洋沿岸海域。主要作业渔场在中国浙江和福建沿岸海域。最高年产量超过8万吨，是世界重要经济种。主要为鲜食。

生殖调控技术也称繁殖调控技术，是动物繁殖学的中药组成弗恩，具体包括发情、排卵、受精、胚胎发育、性别发生、妊娠维持、分娩、泌乳等生殖活动的技术，是提高动物繁殖效率、加快育种速度的基本手段，通过这些调控技术的运用，可以大幅度地提高生产效率，提高畜种的质量，以及以较少的生产资料获取较多的养殖效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂，曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂的制备方法简单易行，本制备方法可以有效防止脑组织失水，延长脑组织活性，保持乌贼神经肽的生殖调控活性，生殖调控饲料添加剂能有效发挥促进细胞生长、分化、增殖等生殖调控作用。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种曼氏无针乌贼神经肽生殖调控饲料添加剂，其制备方法包括：预处理、分离、复合，具体包括以下步骤：

预处理：选取性成熟、活力较强的曼氏无针乌贼个体置于冰上，低温条件下取乌贼脑组织，并小心剥离神经组织周围的结蹄组织，将乌贼脑组织置于冷冻液中，并于-80～-100℃超低温冷冻保存；将解冻后的乌贼脑组织放入离心管中，每50-60只乌贼脑组织加入20-25mL 1.0‰三氟乙酸水溶液，高速匀浆5-6min，2-4℃温度下以15000-18000r/min离心25-30min，取上清液，浓缩至1/2-2/5体积后以0.45μm针头过滤器过滤，滤液在保存；预处理阶段不仅可以较好的保存离体脑组织，较大程度地保留曼氏无针乌贼脑组织的活性，而且通过将脑组织匀浆入三氟乙酸水溶液并离心分离，可以去除多余的脂肪、灰分等杂质，获得脑组织粗提液；

分离：将脑组织粗提液通过RP-HPLC高效液相系统进行分级分离，采用二元流动相梯度洗脱系统进行洗脱分离，分离条件如表1所示，所用流动相均超声处理，收集每min分离组分，收集组分浓缩后于-40～-55℃保存得神经肽GnRH；RP-HPLC技术与其他液相方法不同，由于以组分之间极性差异为依据进行分离，因此可以进行分子量和结构十分接近组分的分离，而且分离过程中不受分子量大小限制，因此特别适用于低分子量多肽的分离纯化，同时不会影响多肽的结构与性质；

表1脑组织粗提液RP-HPLC分离条件